УДК 619:615.355

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОЛОНГИРОВАННОГО ПРЕПАРАТА ИВЕРМЕКТИН, СОЗДАННОГО НА ОСНОВЕ БИОРАЗЛАГАЕМЫХ ПОЛИМЕРОВ

Енгашева Е.С.

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Россельхозакадемии, Москва

В статье представлены результаты исследования фармако-токсикологических, пирогенных свойств и стерильности препарата «Иверлонг». Установлено, что препарат относится к 3-4-ому классу соединений (ЛД₅₀ = 4,67 : 5,73 г/кг) согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76); является непирогенным; удовлетворяет требованиям стерильности.

Ключевые слова: иверлонг, острая токсичность, пирогенность, стерильность, клеточный иммунитет, гуморальный иммунитет, аллергические реакции.

Введение. Создание лекарственных систем пролонгированного действия на основе биоразлагаемых полимеров является приоритетным и перспективным направлением в современной фармакологии. Лекарственные препараты на сегодняшний день в традиционных лекарственных формах не полностью проявляют терапевтический потенциал заключенных в них действующих веществ (ДВ), не устраняют их токсичности и побочного отрицательного действия (1).

Полиоксиалканоаты в последние годы привлекают все большее внимание, благодаря их способности к биоразложению и высокой биосовместимости, что делает их пригодными для создания новых лекарственных форм (4, 5).

Использование биосовместимых полимеров в качестве основных форм не только устраняет многие недостатки традиционных препаратов, но и добавляет новые свойства, такие как пролонгированное действие препарата (2, 3).

Учеными биологического факультета МГУ, института биохимии им. А.Н. Баха и ООО «НВЦ Агроветзащита» разработана лекарственная форма пролонгированного действия ивермектина на основе биоразлагаемых полимеров.

Целью нашей работы было исследование биополимерных микросфер, содержащих ДВ ивермектина, а именно исследование фармако-токсикологических свойств препарата «Иверлонг».

Материалы и методы исследований. Экспериментальные исследования для решения поставленных задач проводились в лаборатории токсикологии и виварии ВНИИВСГЭ.

Острую токсичность препарата изучали на 60 белых мышах - самцах и 12 белых крысах. Исходный вес животных колебался в пределах 21-22 г для мышей и 135 г для крыс. В опыт брали клинически здоровых животных, которые предварительно выдерживались на 15 - дневном карантине. Статистические группы состояли из 6 животных. При введении препарата в желудок были испытаны дозы – 3,3; 5,0; 7,0 и 8,0 г/кг. Расчёт доз производился на 100% лекарственную форму.

За животными вели наблюдение в течение 2-х недель после введения, отмечая сроки гибели или выздоровления животных. Учитывали общее состояние животных, сохранение двигательных функций, аппетита, состояние шерстного покрова, дыхания, реакцию на внешние раздражители.

В опыте использовалась лекарственная форма препарата, т.е. раствор сухого препарата (40% д.в.) в физиологическом растворе – 5% суспензия.

При введении препарата под кожу были испытаны дозы 9,0; 12,0; 13,0; 14,0 г/кг. Расчет доз производили на 100 % лекарственную форму.

Данные смертельного эффекта использовались для определения смертельных параметров - ЛД₁₆, ЛД₅₀ и ЛД_84, величин отношения смертельных доз (ЛД₈₄/ЛД₁₆) и функции угла наклона, а также среднего времени гибели – ТЕ ₅₀.

Иммунотоксические и аллергенные свойства препарата изучали согласно Методических рекомендаций (4).

Оценку гуморального и клеточного иммунитета проводили 2 опытах на 70 белых беспородных мышах весом 18-20 г. Клеточный иммунитет изучали в реакции гиперчувствительности замедленного типа, гуморальный – по титрам гемагглютининов.

Пирогенные свойства препарата «Иверлонг» изучали на трех кроликах массой тела 3,0; 3,2 и 3,3 кг. Испытуемый препарат разводили в физрастворе из расчета 150 мг препарата в 4 мл физраствора, нагревали до температуры 37° С (в термостате) и вводили внутривенно в краевую вену уха кролика по 0,5 мл (специальных указаний по дозировке не было). Последующие измерения температуры проводили 5 раз с промежутками 1 час.

Для определения стерильности использовали жидкую среду Сабуро и тиогликолевую среду. Исследования проводили прямым посевом сфер в питательные среды. Среды с посевами инкубировали при t 37 °C – тиогликолевую среду и 25 °C – Сабуро в течение 5 суток. ПО истечении 5 суток повели пересев с тиогликолевой среды на МПА, с жидкой среды Сабуро – на плотную среду Сабуро.

Результаты и обсуждение

Изучение острой токсичности препарата «Иверлонг» при введении в желудок белым мышам. Результаты определения параметров токсичности представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Результаты острой токсичности препарата «Иверлонг» при введении в желудок мышам

Доза в г/кг	3,3	5,0	7,0	8,0
Выжило	5	3	1	0
Погибло	1	3	5	6

Таким образом, ЛД₅₀ данного средства при введении в желудок составляет 5,2 ± 0,53 (4,67: 5,73) г/кг (по д.в. – 0,1 г/кг) массы тела. Полученный результат свидетельствует о том, что «Иверлонг» по токсичности находится на границе между умеренно и малотоксичными препаратами 3 - 4 класс опасности (5).

У животных, получавших смертельные дозы, наблюдали клиническую картину интоксикации. На следующие сутки после введения препарата у опытных мышей наблюдали нарушение координации движения, шаткость походки, вскоре животные впадали в кому. На 4-6 сутки часть из них погибла.

Для суждения о скорости развития интоксикации определяли время гибели 50% животных (ЕТ₅₀). Для определения ЕТ₅₀ также использовались результаты острого опыта.

Авторы этой разработки (7) считают, что эта величина характеризует индивидуальную чувствительность животных к действию данного вещества в дозах ниже и выше смертельной и является простым и довольно объективным методом оценки способности препарата кумулировать в организме. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2

Определение среднего времени гибели крыс в остром опыте

при введении в желудок.

Дозы (г/кг)	Время гибели в сутках 1 2 3 4 5 6 7	Среднее время гибели от каждой из введенных доз
3,3 5,0 7,0 8,0	- 1 - - - - - - - - 1 2 - - - - - 1 2 2 - - - 1 2 3 - -	2 : 1 = 2,0 (4+10):3=4,7 (4+10+12):5=5,2 (3+8+15) : 6 =4,3

После обработки полученных данных ЕТ ₅₀ для препарата составила 4,1 суток (98 часов), что свидетельствует о том, что препарат способен «умеренно» кумулировать в организме животных.

Предварительная оценка видовой чувствительности к препарату (мыши-крысы) показала большую чувствительность крыс, так как введение в желудок «Иверлонга» в дозе 5,2 г/кг ( DL₅₀ для мышей), вызывало 100% гибель крыс. В дальнейшем предполагается проведение развёрнутого опыта на крысах с введением нескольких доз.

Изучение острой токсичности препарата « Иверлонг» при введении под кожу белым мышам. Результаты определения параметров токсичности представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты острой токсичности препарата «Иверлонг» при введении под кожу мышам

Доза в г/кг	9,0 ! 12,0 ! 13,0 ! 14,0
Выжило	5 4 2 0
Погибло	1 2 4 6

Полученный результат свидетельствует о том, что данный препарат можно отнести к 6 – му классу «относительно безвредных» соединений (6). Клиническая картина интоксикации после введения препарата под кожу проявлялась только к следующим суткам и характеризовалась симптомами, аналогичными таковым в условиях введения в желудок.

Иммунотоксические и аллергенные свойства Иверлонга. Оценку гуморального и клеточного иммунитета проводили на основе тестирования способности организма мышей к выработке антител против тест-антигена при введении испытуемого препарата и реакции гиперчувствительности замедленного типа.

Нами установлено, что препарат в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах вызывает умеренное усиление клеточной реакции формирования гиперчувствительности замедленного типа. Индекс РГЗТ составил 9,64±1,27 % и превысил показатель контроля на 55,5%. Препарат не обладает токсическим действием по титрам гемагглютининов и индексам действия препарата на клетки иммунной системы и составил 0,98 и 0,89 функционирование которых обеспечивает развитие гуморальных реакций.

По результатам эпикутанного тестирования, внутрикожной и коньюнктивальной проб, реакции дегрануляции тучных клеток и содержанию эозинофилов можно сделать вывод об отсутствии у препарата аллергенных свойств.

Испытания на пирогенность препарата «Иверлонг» (сферы с ивермектином). Результаты исследований отражены в таблице 4.

Таблица 4

Суммарные показатели температуры тела у подопытных кроликов

Показатели	Кролик 3,0 кг	Кролик 3,2 кг	Кролик 3,3 кг
Повышение температуры	0,2	0,4	0,2
Сумма повышений температуры	0,8°С

Раствор лекарственного средства считают непирогенным, если сумма повышений температуры у кроликов меньше или равна 1,4°С. Случаи понижения температуры тела у кроликов считаются за ноль.

Результаты определения стерильности препарата «Иверлонг» Помутнения питательных сред отмечено не было. После инкубирования посевов на МПА в течение 24 часов при 37°С рост микроорганизмов отмечен не был. На плотной среде Сабуро рост дрожжеподобных и плесневых грибов отсутствовал.

Заключение. Препарат «Иверлонг», согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76), в условиях однократного введении в желудок находится на границе между умеренно и мало токсичными соединениями, т.е. относится к 3-4-ому классу соединений (ЛД₅₀ = 4,67 : 5,73 г/кг). Препарат вызывает умеренное усиление клеточной реакции формирования гиперчувствительности замедленного типа и не обладает токсическим действием на клетки иммунной системы, функционирование которых обеспечивает развитие гуморальных реакций. Препарат «Иверлонг» считается непирогенным. Сферы с ивермектином (15 июля 2011 г.) удовлетворяют требованиям стерильности.

Литература

1. Манзюк Л.В. Таксол в клинической практике: Дозы и режимы введения таксола// Н.И. Переводчикова. Изд. «Полина»- М, 2001, С. 25-54.

2. Chen C. Q. Biomaterials. 2005. 26. 6565-6578.

3. Park J., Ye M., Park K. Molecules. 2005, 10 (1), 146-161.

4. Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2000, М.

5. ГОСТ 12.1.007-76. «ССБТ Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности», М.,1976.

6. Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В.,Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. Справочник. М., 1977.

7. Красовский Г.Н. Егорова Н.А. и др. Среднее время гибели животных, как параметр для прогнозирования хронической токсичности веществ. Кн. Актуальные вопросы экологической токсикологии М.,1978, с.44-76

PHARMACO-TOXICOLOGICAL PROPERTIES OF PRONGED DRUG IVERMEKTINE THAT ARE BASED ON BIODEGRADABLE POLYMERS

Engasheva E.S.

The paper presents the results of pharmaco-toxicological research, and testing the properties of pyrogenic sterile preparation "Iverlong." It is established that the drug belongs to the 3-4th class of compounds (LD50 = 4.67: 5.73 g / kg) according to the classification (GOST 12.1.007-76) is apyrogenic; satisfy the requirements of sterility.

Key words: iverlong, acute toxicity, pyrogenicity, sterility, cell-mediated immunity, humoral immunity and allergic reactions.