Медицина/7 Клиническая медицина

Яковенко М.А.,* Россихин В.В.,** Лавриненко А.Н.,**

Репринцев В.Л.**

Харьковский национальный университет им. В.Н.Каразина*,

Харьковская медицинская академия последипломного образования **

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ДВУХ ФОРМ НЕКРОСПЕРМИИ

Одним из важных признаков, используемых при лабораторной диагностике тотальной или частичной некроспермии, является нарушение подвижности сперматозоонов в эякуляте. Неподвижные сперматозооны в ряде случаев обнаруживаются при светооптическом исследовании эякулята у больных олигозооспермией.

С.А.Каганом (1974), С.А.Каганом, В.Ф.Машанским (1993) при электронно-микроскопическом исследовании мы установили, что у больных бесплодием с некроспермией выявляются различные по ультраструктуре формы сперматозоонов. В ряде наблюдений некроспермия характеризовалась полным отсутствием фибриллярных элементов хвостика и митохондриального тела. В части случаев неподвижные при светооптическом исследовании сперматозооны имели все характерные для нормального хвостика ультраструктуры. Исходя из этого, можно считаем, что если при сохранении ультраструктуры головки и хвостика имеется возможность для поиска методов терапевтического воздействия, то при ее отсутствии прогноз весьма неблагоприятный. Однако проведение у каждого больного с некроспермией электронно-микроскопического исследования является весьма трудоемким и доступно лишь небольшому числу учреждений.

Разработана новая методика дифференциальной диагностики некроспермии с использованием метода глицериновых моделей. За основу взят метод, примененный Гофман-Берлингом (1957) при исследовании спермиев некоторых животных. Сущность метода заключается в экстрагировании свежих сперматозоонов в растворах, из которых удалены вещества, способные тормозить или ингибировать сократительную способность элементов, не подвергающихся экстракции в этих растворах. После экстрагирования при добавлении АТФ и ионов магния и кальция происходит кратковременная активация сократительной способности фибриллярных элементов хвостика (Н.И.Аронет, 1988).

Методика. После светооптического исследования, в котором устанавливается диагноз некроспермии, порцию свежего эякулята разводят в растворе Тироде в соотношении 1 :6, охлаждают в течение 1 ч до 20 °С и смешивают с охлажденным раствором следующего состава: 50 % глицерин, 0,12 М фосфатный буфер рН 7,0, 0,005 М ЭДТА, 0,001 М тиогликолат, 0,1 % дигитонин, 3,5 % агар. Экстракцию производят в течение 20 мин. Для реактивации небольшое количество суспензии помещают в раствор следующего состава: 0,16 н. КС1, 0,1 М трис-НСl-буфер, 0,04 М MgCl₂, 0,001 М СаСl2, 3,5 % агар и 1 х 10-³М АТФ. Немедленно каплю суспензии помещают под микроскоп. Появление движения хвостиков свидетельствует о сохранности фибриллярных элементов. В случае необходимости методика может быть упрощена: эякулят заливают 2—3 объемами 50 % глицерина и держат сутки в холодильнике. Каплю суспензии смешивают с 2—3 каплями следующего раствора: 0,12 н. КСl, 1 х 10~² M фосфатный буфер рН 7,0, 5-10-² М MgCl₂ и через несколько минут к суспензии на предметном стекле добавляют каплю АТФ (1 х 10-³ М).

Наличие движения хвостиков свидетельствует о сохранности их фибриллярного аппарата, и, следовательно, нарушение подвижности ин-тактных сперматозоонов зависит от особенностей их биохимических пусковых аппаратов.

До настоящего времени диагностику некроспермии осуществляли микро-скопическим исследованием эякулята. При этом имелось 2 критерия: 1) неподвижность сперматозоонов и 2) изменения сорбционных свойств при окрашивании сперматозоонов витальными красителями. При этом «мертвые», вернее поврежденные, сперматозооны воспринимают окраску, тогда как живые, неизмененные, остаются неокрашенными ( Burgos M. H., Di Paola G, 1991; Crose A. C, Mann A. M., 1947; Joel Ch. A., Kwiat S., 1995).

Однако известны случаи, когда неподвижность сперматозоонов сопровождается отсутствием способности к сорбции витальных красителей. Данные электронной микроскопии показывают, что в ряде наблюдений ультраструктура сперматозоонов больных некроспермией не отличается от нормальных спермиев и лишь в некоторых случаях под электронным микроскопом при некроспермии можно видеть, что в хвостике частично или полностью отсутствуют структуры митохондриального тела и фибриллярный аппарат.

Целью предлагаемой методики является использование глицериновых моделей для того, чтобы установить у больных некроспермией наличие или отсутствие способных к сокращению фибриллярных элементов хвостика сперматозоонов, лишенных подвижности. Это достигается благодаря тому, что экстракция глицерином сохраняет механохимическую способность хвостика при добавлении надлежащих веществ, но экстрагирует компоненты клетки, участвующие в регуляции и координации движения.

Предложенным методом удается провести дифференциальную диагностику двух форм некроспермии; появление подвижности хвостика свидетельствует о форме заболевания, при которой поиски методов его лечения могут быть перспективными. Эти поиски могут быть целенаправленными, так как появляется возможность выявления и устранения факторов, препятствующих движению хвостика.

ЛИТЕРАТУРА

1. Арронет Н. И. Мышечные и клеточные сократительные (двигательные) модели. — Л., 1988.

2. Гофман-Берлина X. // Современные проблемы биохимии. — М., 1957.— С. 279—291.

3. Каган С. А., Машанский В. Ф. // Урология. — 1993. — № 5. — С. 34—36.

4. Каган С. А. Стерильность у мужчин. — Л., 1974.

5. Burgos M. H., Di Paola G. // Fertil. a. Steril. — 1991. — Vol. 2, N 6. — P. 542.

6. Crose A. C, Mann A. M. // Nature. — 1947. —Vol. 159. —P. 749.

7. Joel Ch. A., Kwiat S. // Schweiz. med. Wschr. —1995. —Bd 85. —N 18. —S. 428.