Медицина/5.Педиатрия

 

Сёмин Е.В., Каграманова К.Г., Блохин Б.М.

Российский национальный исследовательский медицинский университет
имени Н. И. Пирогова, Россия

Генотип HLA у детей и подростков с «атопическим респираторным синдромом» Московского региона

 

Цель исследования

 

            Целью исследования было изучить молекулярно-генетическими методами с помощью олигонуклеотидных зондов и аллель-специфических праймеров полиморфизм системы HLA у детей и подростков кавказоидов московского региона с персистирующим течением «атопического респираторного синдрома» («АРС») и оценить роль различных HLA-специфичностей в формировании данной патологии.

 

Материалы и методы

 

            В исследование было включено 30 детей и подростков в возрасте от 5 до 18 лет (средний возраст 11,3 ± 0,9 лет) с атопической бронхиальной астмой и аллергическим ринитом (риноконъюнктивитом), которые были отнесены к группе «атопического респираторного синдрома» после подписания родителями пациента или пациентом информированного согласия на участие в исследовании. Критерии исключения детей и подростков из исследования был отказ родителей пациента или пациента от подписания информированного согласия и участия в исследовании. Контрольная группа была представлена 1700 условно здоровых новорожденных детей (европеоидов (кавказоидов)), образцы пуповинной крови которых были внесены в реестр неродственных доноров в городе Москве за период с 2004 по 2009 год (данные HLA-типирования предоставлены Л.Л. Лебедевой- заведующей «Лаборатории HLA-типирования» Государственного учреждения здравоохранения «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы»). Диагноз аллергического ринита основывался на диагностических критериях ARIA, 2010 [1]. Диагноз атопической бронхиальной астмы основывался на диагностических критериях GINA, 2006 [2].

            Всем пациентам было проведено общеклиническое и инструментальное обследование, кожно-скарификационное тестирование (тесты «in vivo») с неинфекционными атопическими аллергенами, исследование общего сывороточного иммуноглобулина Е и аллергенспецифических IgE (тесты «in vitro»), HLA-генотипирование методом полимеразной цепной реакции с помощью олигонуклеотидных зондов и аллель-специфических праймеров (PCR-SSO и PCR-SSP). При необходимости осуществлялись консультации врачей-специалистов (врача-оториноларинголога, врача-офтальмолога и врача-пульмонолога).

            Сравнение группы детей с «атопическим респираторным синдромом» и контрольной группы производили c использованием методик Стентона Гланца (1999) [3]. Для статистических вычислений применяли пакет программ для персонального компьютера «Microsoft Office Excel» и «Statistica for Windows», release 6.0 (фирмы «StatSoft Inc.», США) с проверкой значимости различий по точному двустороннему критерию Фишера (p=∑pi) с вероятностью ошибки p< 0,05. Для выявления риска возникновения «АРС» вычисляли относительный риск возникновения заболевания- RR (relative risk) и однофакторное отношение шансов- OR (odds ratio). Относительный риск вычислялся по формуле B. Woolf [4]: RR=, где A- число больных носителей определённой специфичности, B- число здоровых носителей определённой специфичности, C- число больных, не имеющих определённой специфичности, D- число здоровых, не имеющих определённой специфичности. В том случае, когда один из показателей был равен 0, относительный риск вычислялся по формуле, модифицированной J. Haldane для малых чисел [4]: RR= . При небольшом размере выборок среди больных и наличия контрольной группы условно здоровых людей относительный риск возникновения заболевания определяют так же через однофакторное отношение шансов: OR= . Величина OR, равная 1 означает, что исследуемый исход равновероятен в обеих группах. При OR<1 наступление заболевания менее вероятно для пациентов с исследуемой специфичностью. При OR>1 наступление заболевания более вероятно для пациентов с исследуемой специфичностью. Важно отметить, что доверительные интервалы для показателей относительного риска развития заболевания и однофакторного отношения шансов не должны проходить через 1. В противном случае значение риска учитывать нельзя и данные специфичности не могут рассматриваться в качестве маркёров, увеличивающих или снижающих риск развития «АРС».

 

Результаты исследования и их обсуждение

 

            Для изучения генетической предрасположенности к «атопическому респираторному синдрому» был проведён сравнительный анализ распределения аллельных вариантов всех генов HLA в генотипе детей с «атопическим респираторным синдромом» и контрольной группы. В группе пациентов с «АРС» достоверно чаще встречались HLA-специфичности: HLA-A*02 (46,67% (f=0,4667) (f- частота встречаемости специфичностей (в долях), р- точный двусторонний критерий Фишера) случаев в группе пациентов с «АРС», в контрольной группе- 28,70% (f=0,2870), р=0,0038), HLA-В*15 (13,33% (f=0,1333) случаев в группе пациентов с «АРС», против 5,49% (f=0,0549) в контрольной группе, р=0,0149), HLA-В*27 (13,33% (f=0,1333) случаев в группе пациентов с «АРС», против 5,12% (f=0,0512) в контрольной группе, р=0,0123) и HLA-C*03 (в группе с «АРС» выявлялась у 20,00 % (f=0,2000) пациентов, тогда как в контрольной группе- у 9,09 % (f=0,0909), р=0,0105).

            В группе пациентов с «атопическим респираторным синдромом» достоверно реже встречались HLA-специфичности: HLA-A*11 (в группе пациентов с «АРС» не встречалась, в группе контроля встречалась в 6,16% (f=0,0616) случаев, р=0,0491), HLA-В*13 (в группе с «АРС» не встречалась, в группе контроля встречалась в 6,87% (f=0,0687) случаев, р=0,0323), HLA-C*06 (в группе с «АРС» не встречалась, тогда как в контрольной группе встречалась у 13,02 % (f=0,1302), р=0,0006) и HLA-C*12 (в группе с «АРС» встречалась у 3,33 % (f=0,0333) пациентов, в то время как в контрольной группе- у 13,44 % (f=0,1344), p=0,0193).

            Среди вычисленных показателей относительного риска и отношения шансов, высокие и достоверные значения в группе детей с «атопическим респираторным синдромом» были отмечены для следующих специфичностей: HLA-В*15 (RR=2,971, CI-1,474-5,991; OR=3,063, CI-1,343-6,984 (CI- 95%-ный доверительный интервал для истинного относительного риска (RRist) и истинного однофакторного отношения шансов (ORist)), HLA-В*27 (RR=3,126, CI-1,604-6,089; OR=3,229, CI-1,415-7,368) и HLA-C*03 (RR=2,364, CI-1,013-5,518; OR=2,415, CI-1,118-5,217).

            Значения относительного риска и отношения шансов для специфичностей, выявленных в группе детей с «АРС» как статистически значимые отрицательные ассоциации, были меньше единицы для: HLA-C*06 (RR=0,053 (1/RR=18,87), CI-0,028-0,099; OR=0,051 (1/OR=19,61), CI-0,003-0,829) и HLA-C*12 (RR=0,215 (1/RR=4,65), CI-0,093-0,498; OR=0,211 (1/OR=4,74), CI-0,050-0,889). В данной ситуации ассоциацию с «атопическим респираторным синдромом» можно считать отрицательной.

 

Выводы и практические рекомендации

 

1.                      В группе пациентов с «АРС» достоверно чаще встречались HLA-специфичности: HLA-A*02, HLA-В*15, HLA-В*27 и HLA-C*03;

2.                      В группе пациентов с «АРС» достоверно реже встречались HLA-специфичности: HLA-A*11, HLA-В*13, HLA-C*06 и HLA-C*12;

3.                      Генетическими маркёрами у детей и подростков, увеличивающими риск развития «атопического респираторного синдрома», являются специфичности: HLA-В*15 (RR=2,971; OR=3,063), HLA-В*27 (RR=3,126; OR=3,229) и HLA-C*03 (RR=2,364; OR=2,415);

4.                      В группе пациентов с «атопическим респираторным синдромом» выявлены отрицательные ассоциации со специфичностями (то есть, так называемые, протективные аллели): HLA-C*06 (RR=0,053 (1/RR=18,87), OR=0,051 (1/OR=19,61)) и HLA-C*12 (RR=0,215 (1/RR=4,65), OR=0,211 (1/OR=4,74));

5.                      Полученные отдельные HLA-специфичности у детей и подростков с «АРС» рекомендуется использовать в качестве дополнительных маркёров при диагностике атопических заболеваний и дифференциальной диагностике с неатопическими заболеваниями.

 

Литература

 

1.                                             «Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA). 2010 revision. Geneva: World Health Organization (WHO)». Guidelines. // J. Allergy Clin. Immunol., 2010, v. 9/8/2010, p. 21;

2.                                             «Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы». // Под ред. Чучалина А.Г. Москва, Издательский дом «Атмосфера», 2007, с. 8, 75-77;

3.                                              Гланц С. «Медико-биологическая статистика». // М.: Практика, 1999, с. 122-220;

4.                                             Певницкий Л.А. «Статистическая оценка ассоциаций HLA-антигенов с заболеваниями» // Вестник АМН СССР, 1988, №7. с. 48-51.