Панкрушина А.Н.¹, Жигулина В.В.²

¹ – Тверской государственный университет

² - Тверская государственная медицинская академия

ПОВЕДЕНИЕ ЛИЗОЦИМА МОЧИ ПРИ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКИМ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТОМ

Бурное развитие химии природных соединений и молекулярной биологии требует разработки и совершенствования эффективных методов исследования и, прежде всего, высокочувствительных. Клиническая медицина также крайне нуждается в быстрых и точных методах диагностики. Серьезную помощь в решении этих задач может оказать метод электрофореза в полиакриламидном геле. Этот метод позволяет производить разделение белков, протеидов, полипептидов, нуклеиновых кислот. Метод электрофореза белков и лизоцима мочи, наряду с другими методами, используется для диагностики различных почечных заболеваний. Все почечные заболевания характеризуются однотипными изменениями в составе мочи различной степени выраженности. Поэтому, в сомнительных случаях существующих лабораторных показателей недостаточно для четкой дифференциальной диагностики гломерулонефритов, пиелонефритов и других нефропатий. При этом оценка альтернативных методов диагностики, позволяющих восполнить этот недостаток, крайне желательна. Целью настоящей работы явилось исследование электрофоретического поведения белков и лизоцима мочи в полиакриламидном геле при хроническом гломерулонефрите (поражение клубочкового аппарата).

Для анализа использовали разовую порцию мочи, собранную в утренние часы. В каждом образце проводили исследование белков мочи методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и определяли положение лизоцима мочи. Оценку результатов электрофореза белков мочи проводили по количеству и подвижности белковых фракций. Оценку результатов электрофореза лизоцима мочи проводили по положению зон просветления ацетонового порошка Micrococcus lysodeicticus, добавленного в гель.

Из результатов электрофореза белков мочи у больных с хроническим гломерулонефритом видно, что картина белковых фракций в гелях соответствует таковой, описанной в литературе, то есть белки на электрофореграмме представлены, в основном, альбуминами и глобулинами, с подвижностью меньшей, чем у альбуминов. При этом, соотношение экскретируемых белков различно. Количество фракций преальбуминов в этих случаях не превышает три, в некоторых случаях больше трех. В литературе наличие выраженных преальбуминов (как по числу фракций, так и по интенсивности окраски) рассматривают как признак поражения проксимальных отделов канальцев. При гломерулонефрите поражаются клубочки нефрона: потеря отрицательного заряда базальной мембраной. В норме фильтрация крупных белков через гломерулярный фильтр ограничена вследствие того, что и белки плазмы, и базальная мембрана клубочков заряжены отрицательно, то есть, белки в норме к мембране не подходят. Усиление фильтрации белков в клубочках связано с потерей базальной мембраной отрицательного заряда. Таким образом, в результате потери мембраной отрицательного заряда облегчается подход белков к мембране и, следовательно, усиливается их фильтрация. Поражение дистальных отделов канальцев наступает в далеко зашедших стадиях болезни, поэтому у ряда больных отсутствуют нарушения реабсорбции белков в проксимальных отделах канальцев (количество преальбуминов не превышает трех, и они слабо выражены).

В гелях, соответствующих электрофорезу лизоцима мочи при хроническом гломерулонефрите, обнаружена его активность. Причины появления лизоцима в моче не совсем ясны. По-видимому, его экскрецию можно объяснить активацией системы очистки базальной мембраны клубочков от осаждающихся на них иммунных комплексов с помощью моноцитов с их последующим усиленным распадом и выходом лизоцима в мочу. При гломерулонефрите катодное положение лизоцима объясняется образованием тройного комплекса из лизоцима, отрицательно заряженных кислых мукополисахаридов и альбуминов. Комплекс имеет подвижность альбумина. Появление в моче кислых мукополисахаридов также связано с нарушением базальной мембраны клубочков. Кроме того, в других гелях, соответствующих электрофорезу лизоцима мочи при хроническом гломерулонефрите, выявлены дополнительные фракции в анодной части геля. Из литературы известно, что при поражении клубочков имеет место катодное расположение зоны лизиса, соответствующее местонахождению лизоцима. Анодное положение лизоцима свидетельствует о поражении канальцевого аппарата нефрона. В данных гелях можно думать о сочетанном поражении клубочкового и канальцевого аппарата почки, что подтверждается картиной, полученной при электрофорезе белков мочи, где, наряду с типичной картиной, наблюдаемой при гломерулонефрите, имеет место увеличение количества фракций преальбуминов, свидетельствующее о вовлечении в процесс канальцевого аппарата почки.

При проведении модельных экспериментов для объяснения механизма различий электрофоретической подвижности лизоцима видно, что его положение определялось наличием и концентрациями альбумина и кислого мукополисахарида – гепарина. Альбумин практически во всех почечных заболеваниях присутствует в моче, в то время как появление достаточных концентраций кислых мукополисахаридов в моче представляется возможным лишь при потере заряда базальной мембраной клубочков. На наш взгляд, различия в электрофоретическом поведении лизоцима при различной патологии почек объясняются различиями в концентрациях экскретируемых белков и кислых мукополисахаридов. Лизоцим, в данном случае, является удобным индикатором комплексообразования между этими компонентами.

Преимущество метода электрофореза мочи состоит в том, что, по мнению авторов, он позволяет путем одного анализа отдифференцировать пиелонефрит (поражение канальцевого аппарата) и гломерулонефрит, то есть установить факт потери заряда базальной мембраной клубочка нефрона без применения биопсии.