Биологические науки/ 8.Физиология человека и животных.

Преподаватель Оразбаева А.М., к.б.н. Ахметова Ш.Б.

Академический Инновационный Университет, Казахстан

Влияние возраста и периода взятия крови у жеребых кобыл на выход сухого гонадотропина.

В настоящее время в биотехнологии трансплантации эмбрионов используются различные гормональные препараты для индукции суперовуляции у доноров и синхронизации охоты у реципиентов. Практика показывает, что наиболее результативными и эффективными препаратами остаются СЖК разной очистки и гонадотропины. Однако, из-за не совершенности определения гонадотропной активности и не достаточной изученности факторов, влияющих на активность гонадотропина в сыворотке, значительно снижают экономическую эффективность использования препаратов изготовленных на основе СЖК. Это указывает на необходимость более детального изучения положительных и отрицательных причин влияющих на гонадотроп-ную активность СЖК и на этой основе совершенствования традиционных с целью разработки новых методов производство отечественных гонадотропи-нов для ускоренного воспроизводства и увеличения производство продукции сельскохозяйственных животных, отвечающей потребностям постоянно меняющейся конъюктуры рынка.[4]

За последнее десятилетие в силу неблагоприятно сложившихся экономических условий производства в сельском хозяйстве, в нашей стране произошло значительное снижение численности поголовья в различных отраслях животноводства, что неблагоприятно отразилось на количестве выпускаемой продукции.

В таких условиях решить проблему не представляется возможным без использования естественных гормонов и их синтетических аналогов для регулирования процессов размножения у сельскохозяйственных животных, а также без внедрения в производство метода трансплантации эмбрионов при создании оптимальной структуры стада высокопродуктивных животных и для качественного улучшения. [3]

В данных обстоятельствах выход, наряду с повышением сохранности поголовья, следует искать в совершенствовании методов регуляции репродуктивной функции животных. Одним из них является использование гормональных препаратов на основе гонадотропина сыворотки жеребых кобыл (СЖК), который эффективно применяют с целью повышения многоплодия в овцеводстве, свиноводстве, звероводстве, мясном скотоводстве, а также с целью синхронизации охоты и борьбы с некоторыми видами функционального бесплодия у самок сельскохозяйственных животных. [7]

Препарат СЖК содержит гонадотропный гормон, который при введении животному стимулирует функцию половых желез, вызывает развитие дополнительных фолликулов при полноценном половом цикле и регулирует его фазы при некоторых формах бесплодия.[2]

Заготовка сыворотки жеребых кобыл осуществляется в период с 40-45 по 90-100 дней жеребости, когда в ней содержится максимальное количество гонадотропных гормонов. Однако, вследствие незавершенных методов определения гонадотропной активности, а также достоверно не изученных факторов прямо или косвенно влияющих на активность гонадотропина сыворотки, вопрос рационального использования животных реципиентов, улучшения

качества, а также увеличения производства СЖК остается открытым, что в конечном итоге снижает экономическую эффективность использования препаратов, изготовленных на основе СЖК. Все это требует более детального изучения причин влияющих на гонадотропную активность СЖК, а также совершенствования традиционных и разработки новых методов определения гонадотро-пина в сыворотке крови жеребых кобыл, отбора продуцентов ГСЖК и получения сухих гормонов. [5]

Впервые для получения сухого ГСЖК предложен и внедрен метод иммуноферментной диагностики активности гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл, а также проведена его сравнительная оценка с биологическим методом определения активности СЖК. Дано технологическое обоснование выбора наиболее приемлемых продуцентов гонадотропина для сублимации сухого ГСЖК. [8]

На основании сравнительной экспериментальной оценки существующих технологий приготовления и очистки СЖК разработан новый способ получения сухого гонадотропина методом сублимации, включающий, гормональную диагностику жеребых кобыл, взятие крови, технологию приготовления нативного СЖК, поэтапное осаждение балластных белков и гонадотропина из сыворотки крови жеребых кобыл, центрифугирование, растворение осадка гонадотропина, коррекцию показателя рН раствором едкого натра, добавление стабилизатора, осветление, стерилизующую фильтрацию, замораживание, сублимацию и высушивание готового препарата, отличающийся тем, что с целью получения сухого гонадотропина с оптимальным соотношением ФСГ/ЛГ используют иммуноферментный метод диагностики с последующим контролем биопроб на крысах, и для повышение выхода целевого продукта в качестве донора - репродуцента крови отбирают только 3-8 летних жеребых кобыл со сроком жеребости 58-65 дней с активностью сыворотки крови не менее 133 ИЕ/мл, приготовленной в июнь-июль месяцах, и получением гонадотропина до 85,0% с соотношением ФСГ/ЛГ 3:1. [6]

В целом, возраст доноров и период взятия крови от жеребых кобыл на уровень осаждения балластных белков существенное влияние не оказывает.

Выход сырой массы гонадотропина после очищения от балластных белков составил 66,34 г с учетом возраста кобыл доноров и периода взятия крови. При этом, в зависимости от возраста кобыл доноров выход сырой массы гонадотропина составил в пределах от 14,27 до 12,49 г (таблица 1).

Таблица 1 - Выход сырой массы гонадотропина из СЖК, полученной от кобыл-доноров разного возраста

Возраст доноров	Объем центрифугата, мл	Добавление этилового спирта, мл	Объем центрифугата после смешивания с этиловым спиртом, мл	Получение сырой массы гонадотропина,
3-5	1736,0	2171,0	3907,0	14,27
6-8	1651,0	2065,0	3716,0	13,56
9-11	1610,0	2012,0	3622,0	13,22
12-14	1563,0	1954,0	3517,0	12,83
15-17	1495,0	1869,0	3364,0	12,49
Всего	8057,0	10073,0	18130,0	66,34

Например, от кобыл-доноров в возрасте 3-5 лет выход сырого гонадотропина составил 14,27 г., в возрасте 6-8 лет - 13,56 г., в возрасте 9-11 - 13,22 г., в возрасте 12-14 - 12,83 г., в возрасте 15-17 - 12,49 г. Отсюда следует, что возраст доноров-продуцентов существенно влияет на выход сырой массы гонадотропина. Причем с возрастом выход сырой массы гонадотропина снижается на 12,5%.

Также установлено, что период приготовления СЖК значительно влияет
на степень осаждения гонадотропина. Сыворотка жеребых кобыл, взятая в мае
месяце после технологических процессов, составила 20,43 г., в июне - 22,81
г., июле-23,13 г (таблица 2).

Таблица 2 - Влияние сезона года на степень осаждение гонадотропина

Периоды взятия крови от доноров	Объем центрифугата	Добавлено этилового спирта	Объем центрифугата после добавления этилового спирта	Выход сырого гонадотропина
Май	2485,0	3106,0	5591,0	20,43
Июнь	2779,0	3475,0	6254,0	22,81
Июль	2793,0	3492,0	6285,0	23,13
Всего	8057,0	10073,0	18130,0	66,34

Таким образом, установлено, что возраст кобыл-доноров и период взятия препарата на выход сырой массы гонадотропина существенного влияния не оказывает.

В ходе исследований нами также изучалось влияние разных температур на скорость замораживания раствора (таблица 3).

Таблица 3 - Длительность замораживания биоматериала в зависимости от температуры замораживания

Способы замораживания	Активность СЖК, м.е.	Объем гонад отр опного раствора, л	Кол-во пробирок	Длительность замораживания раствора, час
Медленный	280	1,8	19	20,0±2,11
	320	2,8	27	20,3±1,90
	340	4,0	28	21,0±1,88
В среднем		8,6	74	20,5±1,12
Ускоренный	280	1,8	18	6,3±0,78
	320	2,7	26	6,0±0,65
	340	3,6	28	6,4±0,62
В среднем		8,1	72	6,2±0,39
Всего		16,7	146	20,1±0,74

Из полученных материалов, обобщенных в таблице 19, видно, что длительность замораживания препарата раствора достоверно зависит прежде всего от способов замораживания. При медленном способе замораживания биоматериала длительность процесса охлаждения существенно замедляется, и составляет 20,5±1,12 часов.

Эффективность действия ускоренного способа на процесс полного замораживания целевого биопродукта достоверно выше, чем медленный способ. Разница по скорости замораживания гонадотропного раствора между сравниваемыми способами составила 14,3 часов (Р< 0,001).

Аналогичная ускоряющая тенденция при замораживании биоматериала наблюдается и в зависимости от толщины слоя исследуемого раствора (таблица ).

Таблица 4 - Влияние толщины слоя раствора на длительность замораживания биоматериала

Толщина слоя раствора, см	Способы замораживания
	медленный		уско	ренный
	кол-во пробирок	время, ч	кол-во пробирок	время, ч
0,5-2,0	38	12,4±0,58	39	3,7±0,28
2,0-3,2	36	29,0±0,80	33	9,2±0,32
В среднем	74	20,5±1,08	72	6,2±0,38

В результате исследований длительности замораживания биоматериалов в зависимости от толщины их слоя при фасовке были выявлены существенные различия между медленным и ускоренным способами.

Литература.

1. Aron G., Aron M., Maresco H. Влияние лютеинизирующего гонадотропина на яичник гипофизэктомированной морской свинки. «Compt. rend Soc.biol.» 1959, N4. 133 б.

2. Legg S.P., D.H. Curnow, S.A. Simpson: Biochem. J., 1950. 19,46 б.

3. Юлес М. Регуляция деятельности половых желез. Будапешт, 1961. 56 б.

4. Завадовский М. М. Произвольные возбуждение овуляции, течки и охоты у сельско-хозяйственных животных. «Проблемы животноводства», 1934, N4.

56-63 б.

5. Заводовский М. М. Гормональный метод стимуляции многоплодия овец

«Селхоз изд», 1941г. 47 б.

6. Завадовский М. М. Однократная и двукратная (с интервалом в 15-16 дней инъекция гонадотропных агентов овцам в «мертвый» сезон как метод стимуляции «овуляции», «течки» и «охоты». Тр. По динамике развития, т. XI. М.-Л., 1939. 46-51 б.

7. Buckner G. D., Ynsko W. M., Martin J. H.- «Amer. Journ. Physiolog.», 1933, N3. 103 б.

8. Киршинблат Я. Д., Гречишкина А. П., Сербенюк В. М., Чигрина З. Г. Влияние парасимпатического отдела нервной системы на чувствительность яичников к гормонам. «Укр. Физиол. журнал», 1962, N8. 286-300 б.