Частота обнаружения Helicobacter pylori у больных с заболеваниями печени и желчного пузыря

Исаева Г.Ш., Валеева Ю.В., Поздеев О.К.

Казанский государственный медицинский университет

Введение. В последнее время в печати активно обсуждается вопрос о связи H.pylori не только с заболеваниями гастро-дуоденального отдела желудочно-кишечного тракта, но и с заболеваниями гепатобилиарной системы (ГБС), поджелудочной железы и кишечника.

Цель исследования: Установить степень инфицированности H.pylori слизистых оболочек желудка, желчевыводящих путей, желчи и печени у больных с различными заболеваниями ГБС.

Материалы и методы. Обследовано 65 пациентов с диагнозами: хронический некалькулезный холецистит (25), желчекаменная болезнь (28), цирроз печени (12). Контрольную группу составили 11 пациентов без патологии гепатобилиарной системы. Средний возраст пациентов составил 56,5 лет. Материалом для исследования служили образцы желчи, слизистой желчного пузыря (ЖП) и желчных протоков, ткань печени, отобранные при оперативном вмешательстве. Больным этих групп было проведено эндоскопическое исследование верхних отделов пищеварительного тракта, в ходе которого были отобраны биоптаты слизистой оболочки желудка из антрального отдела. Серологическое исследование крови пациентов показало отсутствие маркеров вирусных гемоконтактных гепатитов.

Полученные асептически пробы желчи и тканей помещали в стерильные пробирки, маркировали и до транспортировки хранили при -20 °С не более одной недели. Выделение ДНК из биопроб производили с использованием набора «Хеликопол» (НПФ «Литех», г. Москва) в соответствии с рекомендациями производителя.

Амплификацию специфических фрагментов генома H.pylori производили по методике, предложенной НПФ «Литех». Определяемыми фрагментами ДНК являлись гомологичные участки гена ureC H.pylori. Выявление амплифицированных фрагментов осуществляли путем их электрофоретического разделения в 2% геле с добавлением 1% раствора бромистого этидия и визуализации в виде светящихся полос, соответствующих 492 п.н., под действием ультрафиолетового свечения. Результаты документировали с помощью видеосистемы для регистрации гелей "DNA Analyzer" (НПФ "ЛИТЕХ", Россия) (рис.1).

Рис1. Детекция ДНК Helicobacter pylori в клинических образцах с помощью ПЦР. 1-3 – исследуемые образцы ; К^- - отрицательный контроль; К⁺ - положительный контроль; М – маркер.

Для выделения культуры H.pylori из биоптатов слизистой оболочки желудка и желчи было использовано бактериологическое исследование. Биоптаты помещали в пробирки с 5 мл транспортной тиогликолевой средой и в течение 4-6 часов с момента взятия материала доставляли в лабораторию. Из биоптата готовили взвесь в 1 мл физиологического раствора. Производили посев по одной капле гомогената и цельной желчи на три чашки: с кровяным агаром (контроль), кровяным и эритрит-кровяным агаром, дополненными амфотерицином В (опыт). Опытные чашки культивировали в микроаэрофильных условиях, контрольную – в аэробных - в течение 3-7 дней при 37 ⁰С. Принадлежность культур к H. pylori определяли по характерной морфологии колоний, изучения морфологии бактерий при микроскопии мазков из выросших колоний, окрашенных по Граму и разведенным фуксином, изучения «винтообразной подвижности» в препарате «раздавленная капля» методом фазово-контрастной микроскопии, способности к росту в микроаэрофильных условиях, а также определением оксидазной, каталазной и уреазной активности.

Результаты. Результаты обнаружения H.pylori у больных с различными заболеваниями ГБС и контрольной группы представлены в таблице.

Таблица. Обнаружение H.pylori в клинических образцах.

Детекция H.pylori	хронический некалькулезный холецистит, n=25	желчекаменная болезнь, n=28	цирроз печени, n=12	контроль, n=11
H.pylori-положительный результат в ГБС n (%)	14 (56±9,9%) в желчи	2 (7,1±4,9% %) в желчи; 0% в ткани желчного пузыря	4 (33,3±13,6%%) в ткани печени; 8 (66,7±13,6% %) в желчных протоках	0%в ткани печени 0% в ткани желчных протоков
H.pylori-положительный результат желудке n (%)	22 (88±6,5% %)	13 (46,4±9,4% )	10 (83,3±10,8%)	1(9±8,6% )

ПЦР-анализ образцов ДНК, полученных из желчи больных хроническим некалькулезным холециститом, ассоциированным с эрозиями, язвенной болезнью и желчным рефлюксом, показало присутствие ДНК H.pylori в 56±9,9% образцов желчи. При бактериологическом исследовании биоптатов слизистой оболочки желудка в этой группе культура H.pylori была выделена в 88±6,5% случаев, из желчи в 6 случаях удалось получить чистую культуру этого микроорганизма. При молекулярном исследовании желчи больных желчекаменной болезнью нуклеотидные последовательности H.pylori были обнаружены в двух случаях, в ткани желчного пузыря ДНК этого микроорганизма не обнаружена. При бактериологическом исследовании биоптатов желудка этот микроорганизм был выделен у 46,4±9,4% пациентов. При посеве желчи был обнаружен рост энтеробактерий, преимущественно протея. При ПЦР-исследовании в 33,3±13,6% образцов тканей печени, в 66,7±13,6% желчных протоков и в 83,3±10,8% образцов слизистой оболочки желудка у больных циррозом была обнаружена ДНК H.pylori. В контроле H.pylori не был выявлен ни в одном образце ткани печени и желчных протоков.

Анализ результатов, полученных в ходе нашего исследования, показал корреляцию клинического диагноза с половой принадлежностью, возрастом и присутствием хеликобактерной ДНК в эпителии слизистой оболочке желчных протоков. На возможное участие H.pylori в развитии хронических воспалительных заболеваний ГБС указывают результаты детекции ДНК этого микроорганизма в опытных и контрольной группах (р<0,05). Являясь типичным эпителиальным патогеном, H.pylori достоверно чаще выявлялся в эпителии слизистой оболочки желчных протоков (66,7±13,6%) и в желчи (56±9,9%), чем тканях печени (33,3±13,6%)(р<0,05). Частота обнаружения этого микроорганизма в слизистой оболочке желудка (83,3±10,8%) у больных циррозом печени коррелировала с частотой обнаружения в слизистой желчных протоков (66,7±13,6%), что указывает на существование восходящего пути колонизации H.pylori ГБС – через желчные протоки из-за дуоденально-желчного рефлюкса.

Вывод. Возможно, что анатомо-функциональная взаимосвязь гепато-дуоденальной зоны является одной из причин общности патологических механизмов развития сочетанной патологии. Объединяющим фактором здесь может служить инфицирование H.pylori, хотя патогенетические механизмы участия этого микроорганизма в развитии заболеваний ГБС пока не ясны, надеемся, что дальнейшие исследования в этом направлении помогут их расшифровать.