Біологічні науки / 8.Фізіологія людини і тварин

Григорова Н.В., Єщенко Ю.В., Карпов А.К., Бовт В.Д., Єщенко В.А.

Запорізький національний університет

Гормональна корекція дефіциту цинку в В-інсулоцитах у алоксанових мишей і щурів

Алоксан викликає вибіркове пошкодження клітин В острівців і розвиток діабету у мишей і щурів [1]. При цьому розвивається дефіцит цинку в клітинах [2-6]. З точки зору корекції змін, викликаних алоксаном, представляє інтерес вивчення впливу стресових гормонів на дефіцит цинку при алоксановому діабеті.

У дослідах були використані миші та щури, яким алоксан уводили підшкірно в дозі 200-400 мг/кг. Тварин забивали через 5 діб після ін’єкції речовини. В окремих дослідах алоксанові тварини отримували адреналін, преднізолон, інсулін.

Для цитохімічного визначення цинку шматочки підшлункової залози фіксували впродовж 12 годин у холодному (+4 ºС) ацетоні, потім витримували в двох ксилолах протягом 15 хвилин у кожному, суміші 50%-вого ксилолу та 50%-вого парафіну (30 хвилин при 40 ºС), двох рідких парафінах (по 1,5 години в кожному при 56 °С) та замикали в парафін.

Зрізи 5–10 мкм завтовшки депарафінували в двох ксилолах (по 3 хвилини в кожному), спиртах (абсолютному, 96º, 90º, 80º, 70º по 3 хвилини в кожному), дистильованій воді (5 хвилин).

Для постановки цитохімічної реакції 8–(п-толуолсульфоніламіно)–хіноліну (8–ТСХ) на зрізи наносили на 1 хв. по декілька крапель 0,01% -вого ацетонового розчину цього реагенту.

Потім їх впродовж 5 хвилин промивали у дистильованій воді, замикали в гліцерин і розглядали під люмінесцентним мікроскопом (світлофільтри ФС-1, ЖС-18). На препаратах у цитоплазмі панкреатичних клітин В визначали гранули, що люмінесценціювали жовто-зеленим світлом.

Інтенсивність люмінесценції визначали мікрофлуоріметрією зрізів. Отримані дані переводили в мкг/г за допомогою калібрувальної кривої, яка побудована на підставі даних люмінесценції (по вісі ординат) і концентрації цинку в стандартних розчинах (по вісі абсцис). Результати кількісного дослідження піддавали статистичній обробці. Визначали середню арифметичну величину (₎, похибку (m), показник вірогідності (р).

У контрольних (інтактних) мишей цинку визначалось в панкреатичних клітинах В 84 ± 7,3 мкг/г, а щурів - 2,1 ± 1,8 мкг/г. При введенні адреналіну спостерігалось підвищення вмісту цинку в цих клітинах на 50 % (р < 0,001) у мишей і на 38 % (р < 0,01) – у щурів. Преднізолон викликав схожі результати: відповідно 50 % (р < 0,001), 43 % (р < 0,001). Подібні дані одержані при введенні інсуліну: 51 ± 4,4 (р < 0,001) у мишей і 16 ± 1,4 (р < 0,01) – у щурів.

Таким чином, стресові гормони викликали корекцію дефіциту цинку в В-інсулоцитах у алоксанових тварин. Підвищення вмісту цього металу в В-клітинах можна пояснити пригніченням їх секреторної активності, в результаті чого цей метал накопичується в них у комплексі з інсуліном («депо-форма» гормона). Однак повного відновлення в пошкоджених алоксаном клітинах не спостерігається. Клітини, які сильно пошкоджені, практично не відновлюються. Значне накопичення цинку можливе лише в слабо альтерованих клітинах.

Література:

1. Гольдберг Е.Д., Ещенко В.А., Бовт В.Д. Сахарный диабет. Этиологические факторы. - Томск: Изд-во Томск. ун-та, 1993. - 136с.

2. Григорова Н.В. Вплив екстремальних факторів на вміст цинку в клітинах: Автореф.дис. … канд..біол.наук: 03.00.13 – фізіологія людини і тварин. – Сімферополь: Таврійський нац.ун-т ім.В.І.Вернадського, 2002. – 20с.

3. Григорова Н.В. Стан гранулоцитів крові при діабеті різного ступеня тяжкості // Матеріали Міжнародної конференції «Біологія ХХІ століття: теорія, практика, викладання». – К.: Фітосоціоцентр, 2007. – С.306-307.

4. Григорова Н.В. Стан панкреатичних острівців мишей і щурів при введенні сульфату міді тваринам, отримавшим алоксан // Питання біоіндикації та екології: Період. наук.видання - Запоріжжя: ЗНУ, 2008. – Вип.13, №2. – С.163-169.

5. Григорова Н.В., Єщенко Ю.В., Бовт В.Д., Єщенко В.А., Миргородська К.П., Важненко О.В., Задорожня В.Н. Вплив охолодження та алоксану на вміст цинку та секреторного матеріалу в клітинах // Питання біоіндикації та екології: Період. наук. видання. – Запоріжжя: ЗНУ, 2007. – Вип.12, №2. – С.159-166.

6. Григорова Н.В., Єщенко Ю.В., Бовт В.Д., Єщенко В.А. Вплив хлориду алюмінію на стан гранулоцитів крові тварин з алоксановим діабетом // Сборник научных трудов по материалам международной научно-практической конференции «Современные направления теоретических и прикладных исследований 2009». Т.27. Биология, физическое воспитание и спорт. – Одесса; Черноморье, 2009. – С.45-47.