Субпопуляционный состав лимфоидной инфильтрации в биоптате печени у больных хроническими вирусными гепатитами В и С

К.Т. Умбетова, А.С. Лазарева, М.В Киселевский, Т.Ж. Умбетов, Е.В. Волчкова, С.Г Пак.

Согласно современной гипотезе (Царегородцев, Серова 2003) прогрессирование вирусных инфекций ассоциируется со специфическими дефектами и дисбалансом в системе T-хелперов 1-го и 2-го типов. При развитии персистирующей вирусной инфекции иммунный ответ формируется по второму типу, причём независимо от возбудителя обязательно присутствует аутоиммунный компонент (Walker,1996). Одной из причин развития аутоиммунных проявлений может служить нарушение баланса цитокинов за счет активации аутореактивных Т-клеток антигенпредставляющими клетками (АПК), но ведущую роль в формировании аутоиммунных реакций играют нарушения дифференцировки именно Т-клеточного звена (Чепель, 2008).

Недавно выявлена особая субпопуляция Т-клеток - комплекс T-регуляторных клеток CD4⁺/CD25⁺ (T рег.), которые проявляют гипопролиферативную активность, обладают способностью угнетать активацию и ингибировать секрецию цитокинов CD4⁺/CD25⁺ T-хелперами и CD8⁺ и таким образом препятствуют развитию реакций, направленных на элиминацию чужеродного антигена. В то же время, T-регуляторные клетки CD4⁺/CD25⁺ сдерживают активацию аутореактивных Т и В лимфоцитов (Boettler,2005, Fu 2006), следовательно их присутствие косвенно свидетельствует о наличии аутоиммунных реакций в органе мишени, в данном случае в печени, с чем возможно и связано длительное отсутствие выраженных внепеченочных аутоиммунных реакций. Данные о роли Т реуляторных. лимфоцитов печени при хронических вирусных гепатитах и их роли в инициации иммунного ответа очень малочисленны и противоречивы.

В связи с вышеизложенным представляло интерес изучить особенности лимфоидной инфильтрации в ткани печени у больных хроническими вирусными гепатитами В и С по данным гистологического исследования гепатобиоптатов с последующим определением фенотипа иммунных клеток.

Материалы и методы.

Обследовано 37 пациентов хроническими вирусными гепатитами (13 больных ХГВ и 24 больных ХГС). Исследование проводилось с 2004г. по 2007 г. на базе ИКБ№2 г. Москвы. В исследование вошли 29 мужчин и 8 женщин в возрасте от 19 до 54 лет, средний возраст 34 года. Диагноз хронического вирусного гепатита основывался на клинико-лабораторных данных. У всех больных определяли маркеры вирусных гепатитов в сыворотке крови (HBsAg, anti-HBcor IgM, anti-HBcor IgG, anti-HAV IgM, anti-HCV IgM, anti-HCV IgG, anti-HDV IgM, anti-HDV IgG) методом ИФА. С целью подтверждения активной репликации вируса всем больным проведена полуколичественная ПЦР для выявления HBV-ДНК и HCV-РНК в сыворотке крови с определением генотипа вируса гепатита С,

Всем больным выполнена пункционная биопсия печени по Менгини с последующим морфологическим исследованием биоптатов печени общепринятым методом полуколичественной оценки гистологической активности и фиброза по R.Knodell, адаптированной в отношении гепатитов В и С (K. Ishak). Гистологические препараты окрашивали гематоксилин-эозином для выявления лимфоидной инфильтрации печени и пикрофуксином по Ван-Гизону для выявления соединительной ткани. В лаборатории клеточного иммунитета ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН определяли иммунофенотип клеток печени методом иммуногистохимии на криосрезах и иммуноцитохимии на мононуклеарных клетках, выделенных из биоптатов. Из мононуклеарных лейкоцитов гепатобиоптатов были приготовлены мазки, которые окрашивались эозин-азуром по Романовскому-Гимза и по Браше с контрольной обработкой РНК-азой. Световую микроскопию и фотографирование иммунных клеток печени в окрашенных мазках проводили с помощью фотовидеосистемы Axioplan 2 (фирмы Carl Zeiss, Германия).

Результаты.

Нами выявлена у больных ХГС и ХГВ выраженная лейкоцитарная инфильтрация печени, которая распространялась внутрь печеночных долек уже на ранних этапах инфекционного процесса.. При изучении препаратов печени, окрашенных по Ван-Гизону установлено, что локализация участков развития соединительной ткани печени совпадает с конфигурацией области лейкоцитарной инфильтрации, что подтверждает участие мононуклеарных клеток (МНК) печени в развитии фиброза печеночной ткани.

Выделить для иммуноцитологического анализа достаточное количество мононуклеарных лейкоцитов удалось только из гепатобиоптатов пациентов с выраженной лимфоидной инфильтрацией, что в основном наблюдалось у больных ХГВ

Нам удалось определить, что лейкоцитарные инфильтраты печени у больных хроническими вирусными гепатитами В и С представлены преимущественно следующими субпопуляциями лимфоцитов:

1) Т-лимфоцитами (CD3+)

2) NKT-клетками (CD3+CD16+CD56+)

3) NK-клетками (CD16+CD56+)

4) Цитотксическими лимфоцитами (CD8+).

5) комплекс Т рег. лимфоцитов (CD4+CD25+).

Выявленные нами в лейкоцитарном инфильтрате печени у больных ХВГ цитотоксические лимфоциты (CD8+) и NK-клетки (CD16+CD56+) сходны по составу с клетками в инфильтратах ткани печени при АИГ (Апросина 2002 ).

Идентифицированная в паренхиме печени популяция комплекса Т-регуляторных клеток (CD4+CD25+) вызывает супрессию клеточного иммунного ответа при элиминации вируса и поврежденных тканей и обеспечивает развитие персистирующей вирусной инфекции с аутоиммунным компонентом. В отсутствие антигенемии Т-регуляторные клетки анергичны, но сохраняют способность к распознаванию и к прямой пролиферации в ответ на антигенную стимуляцию. Из литературных источников известно, что при HBV-инфекции Т рег. лимфоциты являются одним из медиаторов супрессии Т-хелперов 1 типа в ответ на HBcAg, так как вызывают увеличение ИЛ-10 секретирующих CD4+CD25+клеток, в свою очередь HBsAg стимулирует Т-хелперы 2 типа (Kondo,2006), обеспечивая развитие персистирующей вирусной инфекции с аутоиммунным компонентом. Можно предположить, что выделенный нами в лейкоцитарном инфильтрате печени комплекс Т-регуляторных клеток (CD4+CD25+) свидетельствует о развитии аутоиммунных реакций в печеночной ткани.

Согласно литературным данным у пациентов с ХВГС индуцированные комплекс Т регуляторных клеток и CD8+ лимфоциты вызывают локальное воспаление в печени (Accapezzato D, 2004). У обследованных нами больных мы выявили в гепатобиоптате только лимфоидную инфильтрацию и не выявили признаков некроза. Данную морфологическую картину можно объяснить присутствием в печеночной ткани комплекса Т-регуляторных клеток (CD4+CD25+).

На основании полученных данных можно сделать вывод, что при морфологическом исследовании гепатобиоптатов у больных хроническими вирусными гепатитами В и С необходимо определять не только гистологическую активность и выраженность фиброза, но и оценивать субпопуляционный состав лейкоцитарных инфильтратов печени для оценки прогноза течения заболевания и выбора тактики лечения.