Биологические науки/9 Биохимия и биофизика

Мурзатаева А.М.

Государственная медицинская академия, Караганда

ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ «СТАХИС» И «СТЕВИЯ» НА СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ РАСТУЩИХ ЖИВОТНЫХ ПОСЛЕ ОДНОКРАТНОГО ВВЕДЕНИЯ НЕСИММЕТРИЧНОГО ДИМЕТИЛГИДРАЗИНА

Целью исследования явилось изучение влияния биологически активных добавок (БАД) на основе стахиса и стевии на структурные свойства эритроцитов крови растущих животных при однократном введении несимметричного диметилгидразина (НДМГ).

Эксперимент проводился на 90 белых крысах – отъемышах обоего пола с исходной массой 45 + 2 грамма. Животные были разделены на 3 группы. Контрольную группу составили 5 самок и 5 самцов, содержащихся на стандартном рационе вивария. В первую группу вошли интактные животные (20 самок и 20 самцов), которые ежедневно с кормом получали БАД на основе стахиса и стевии. Животным второй группы (20 самок и 20 самцов), однократно внутрибрюшинно вводили НДМГ в дозе 5 мг /кг. Животные этой группы ежедневно с кормом получали БАД на основе стахиса и стевии. БАД животные получали из расчета 2 г/кг массы тела. Срок эксперимента составил 30 суток. Животных выводили из эксперимента методом неполной декапитации под легким эфирным наркозом. Определяли осмотическую резистентность эритроцитов (ОРЭ) в гипоосмотических условиях [1]. Результаты выражали в процентах. Результаты обрабатывали методом вариационной статистики. При интерпретации интегральной эритрограммы использовали критерии П.А. Попова о последовательном эритроцитов вовлечении в процесс гемолитической трансформации. Концентрация гипотонического раствора хлорида натрия 0,5 % является нижней границей осмотической резистентности эритроцитов [2-4].

В наших исследованиях использовались различные концентрации хлорида натрия. В диапазоне концентрации хлорида натрия 0.7% – 0.5% в гемолиз вовлекаются эритроциты с низкой устойчивостью, при концентрации 0.45% лизируется основная масса эритроцитов (среднеустойчивые) и при 0.35% – 0.03% – разрушаются наиболее устойчивые эритроциты.

Результаты проведенного исследования представлены в таблицах 1 и 2. Из данных таблицы 1 следует, что у растущих животных контрольной группы пола гемолиз эритроцитов начинается при концентрации гипотонического раствора хлорида натрия – 0.5%. Обращает на себя внимание незначительный процент красных клеток, вовлеченных в гемолиз. При концентрации гипотонического раствора хлорида натрия – 0.45% в гемолиз вовлекаются меньше 50% эритроцитов растущих животных. У животных группы сравнения, получавших стахис, гемолиз эритроцитов начинается при концентрации хлористого натрия 0.7%. При концентрации хлорида натрия 0.5% степень гемолиза превышает таковые контроля на 76% у самок и на 46% у самцов. При концентрации хлорида натрия 0.45% зафиксированы разнонаправленные изменения изучаемого показателя. Так, степень гемолиза эритроцитов крови самок группы сравнения превышала таковую контроля на 33%, тогда как у самцов достоверных отличий от нормы зафиксировано не было. При инкубировании эритроцитов в гипоосмотических растворах хлорида натрия (0.35% и 0.03%) не было зафиксировано отличий по степени гемолиза эритроцитов крови крыс группы сравнения и контроля.

Таблица 1. Влияние НДМГ на осмотическую резистентность эритроцитов растущих животных, получавших БАД на основе стахиса (М+m)

% хлорида натрия	Контроль интактные животные ♀ (n=5), ♂ (n=9)	Группа сравнения Контроль+стевия ♀ (n=10) ♂ (n=10)	Опытная группа НДМГ+стевия ♀ (n=10) ♂ (n=10)
Осмотическая резистентность эритроцитов крови самок
0,00	100	100	100
0,03	98,8±7,5	99,6±7,24	100
0,35	91,3±8,9	91,8±8,89	97,1±12,8
0,45	42,2±2,4	56,3±3,9*	68,3±2,3*
0,50	5±0,4	8,79±1,4*	25,8±1,14*#
0,70	0	2,57±0,38	15,6±1,6#
0,90	0	0	0
Осмотическая резистентность эритроцитов крови самцов
0,00	100	100	100
0,03	99,7±6,7	99,5±10,2	100
0,35	93,3±7,6	88,7±6,67	95,8±5,89
0,45	44,2±3,6	38,7±1,25	65,4±6,35*#
0,50	5,87±0,123	8,6±1,23*	32,4±3,32*#
0,70	0	1,3±0,556	7,5±0,68#
0,90	0	0	0
* достоверность различий по сравнению с контролем, # достоверность различий при сопоставлении с группой сравнения

У растущих животных опытной группы гемолиз эритроцитов начинается при концентрации хлорида натрия 0.7% и достоверно превышали таковой группы сравнения в 6 раз у самок и 5.8 у самцов. При концентрации хлорида натрия 0.5% степень гемолиза эритроцитов у самок опытной группы в 5 раза превышала таковые контроля и группы сравнения, у самцов, соответственно, в 5.5 раз и в 4 раза.

При концентрации хлорида натрия 0.45% степень гемолиза эритроцитов у самок опытной группы превышала таковые контроля и группы сравнения на 60% и 24%, соответственно. У самцов опытной группы степень гемолиза эритроцитов была выше таковой контроля в 1.5 раза. При сопоставлении с группой сравнения не обнаружено достоверных различий по степени гемолиза эритроцитов.

Таблица 1. Влияние НДМГ на осмотическую резистентность эритроцитов растущих животных, получавших БАД на основе стевии (М+m)

% хлорида натрия	Контроль интактные животные ♀ (n=5), ♂ (n=9)	Группа сравнения Контроль+стевия ♀ (n=10) ♂ (n=10)	Опытная группа НДМГ+стевия ♀ (n=10) ♂ (n=10)
Осмотическая резистентность эритроцитов крови самок
0,00	100	100	100
0,03	98,8±7,5	99,87±8,9	100
0,35	91,3±8,9	98,3±7,6	93,8±7,8
0,45	42,2±2,4	54,9±1,45	74,2±9,16*#
0,50	5±0,4	9,7±1,23	46,7±1, 22*#
0,70	0	1,8±0,74	15,8±2,3#
0,90	0	0	0
Осмотическая резистентность эритроцитов крови самцов
0,00	100	100	100
0,03	99,7±6,7	99,8±6,3	100
0,35	93,3±7,6	97,8±10,2	95,6±11,7
0,45	44,2±3,6	49,8±11,6	78,9±8,37*#
0,50	5,87±0,123	7,8±1,65	45,6±5,6*#
0,70	0	1,2±0,47	11,2±3,35#
0,90	0	0	0
* достоверность различий по сравнению с контролем, # достоверность различий при сопоставлении с группой сравнения

У растущих животных, получавших стевию, гемолиз эритроцитов также начинался при концентрации хлорида натрия 0.7%. При инкубации эритроцитов в растворах хлорида натрия в диапазонах концентраций до 0.5% до 0.35% достоверных отличий от контроля зафиксировано не было. У животных опытной группы гемолиз эритроцитов начинался при концентрации хлорида натрия 0.7%. и достоверно превышал таковой группы сравнения у самок в 8.7% (самки) и 9.3 раза (самцы). При инкубации эритроцитов в растворе хлорида натрия с концентрацией 0.5% степень гемолиза эритроцитов крови самок превышала показатель контроля и группы сравнения в 7.8 раз в 4.8 раза, соответственно. При инкубации эритроцитов в растворе хлорида натрия с концентрацией 0.45% степень гемолиза эритроцитов крови самок превышала показатель контроля и группы сравнения на 76% и 35%, соответственно.

Степень гемолиза эритроцитов самцов опытной группы в гипотоническом растворе хлорида натрия с концентрацией 0.5% превышала показатель контроля и группы сравнения в 7.8 раза и 5.8 раз, соответственно. При инкубации эритроцитов крови самцов опытной группы в гипотоническом растворе хлорида натрия с концентрацией 0.45% степень гемолиза красных клеток была выше таковых контроля и группы сравнения, соответственно, на 78% и 58%.

При анализе полученных данных обращает на себя внимание, что у интактных растущих животных, получавших в течение 30 суток БАД, прослеживается тенденция к увеличению процента низкостойких эритроцитов. У растущих животных с однократным ведением НДМГ включение в рацион БАД на основе стахиса и стевии провоцировало выраженное снижение резистентности эритроцитов к осмотическому гемолизу.

Одним из факторов, влияющих на состояние мембран эритроцитов, является активация перекисного окисления липидов (ПОЛ). Ранее было показано, что на 30 сутки после однократного введения НДМГ в эритроцитах крови растущих животных аккумулируются цитотоксичные катаболиты ПОЛ при снижении активности ферментов антиоксидантной защиты [6]. Это позволяет предположить, что одной из причин снижения ОРЭ при включения БАД в рацион растущих животных опытной группы является низкий антиоксидантный потенциал стахиса и стевии. Другой причиной снижения оксидантной защиты и ферментов анения НДМГ в эритроцитах крови растущих животных аккумулируются цитотоксичные катаболиты ПОЛ пОРЭ является эндотоксикоз, обусловленный структурными нарушениями клеток органов растущих животных вследствие деструктивного эффекта НДМГ[7].

В тоже время, как показали наши собственные исследования [8], у интактных животных, получавших БАД, не зафиксирована активация ПОЛ в эритроцитах. Поэтому снижение ОРЭ в данном случае нельзя объяснить модифицирующим эффектом ПОЛ на состояние мембран эритроцитов. По нашему мнению, одной из вероятных причин увеличения низкостойких эритроцитов в крови растущих животных может быть увеличение выхода в кровоток молодых клеток, но это требует дальнейшего изучения.

Литература

1. Тогайбаев А.А., Куогузкин А.В., Рикун И.В., Карибжанова Р.М. Способ диагностики эндогенной интоксикации //Лаб. дело - 1988.- № 9.- С. 22.-24

2.Попов П.А. Структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов при гнойно-септической патологии // Актуальные вопросы хирургии: материалы 18-го межвузовского симпозиума: сб. науч. тр. – М., 2003. – С. 77-78.

3.Анализ структурных свойств эритроцитов в условиях эндогенной интоксикации / П.А. Попов, А.А. Лаврентьев, М.А. Струков, С.В. Ермоленко, Л.Л. Белобородова // Новые технологии в биологии и медицине: сб. науч. тр. – Воронеж, 2004. – С. 128-131.

4.Попов П.А. Анализ субпопуляционного состава циркулирующих эритроцитов в диагностике гнойно-септических состояний // Санкт-Петербургские научные чтения - 2004: материалы IV научно-практической конференции с международным участием: сб. науч. тр. – СПб, 2004. – С. 174.

5.Oxidative metabolism of the growing animals an the unitary injection of nonsymmetrical dimethylhydrazine in condition of little – protein diet / Muravleva L.Ye., Koikov V.V., Muratova A.Z., et. al. //Proceeding of the 5-th National Scientific Conference with International Participation “Reactive Oxygen Species, Nitric Oxide, Antioxidant and Human Health” – Smolensk, 2007- P. 476-478.

6. Структурно-функциональные и метаболические нарушения в растущем организме при действии несимметричного диметилгидразина // Муравлева Л.Е., Кулмагамбетов И.Р., Койков В.В, Медведев В.И. и др. // Тез. докладов Всероссийской конференции «Профессия и здоровье». М., 2006.- С. 607-609

7. Влияние несимметричного диметилгидразина и алиментарного дисбаланса на морфологию печени и почек растущих животных / Муравлева Л.Е., Терехин С.П., Медведев В.А. и др. //Здоровье и болезнь, 2007.- № 10 (66) С. 128-135

8. Влияние несимметричного диметилгидразина на перекисное окисление липидов и активность ферментов антиоксидантной защиты эритроцитов крови растущих животных, получавших биологически активные добавки на основе стахиса и стевии /Муравлева Л.Е., Кулмагамбетов И.Р., Синявский Ю.А. и др. (в печати)