Медицина/8. Морфология

Д.м.н. Козлова Н.М., д.м.н. Тюрюмин Я.Л., к.м.н. Голубев С.С.,

 Раевская Л.Ю.

 

Иркутский государственный медицинский университет; Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения РАМН; Иркутский областной клинический консультативно-диагностический центр,  Россия

Уровень экспрессии циклооксигеназы-2 в зависимости от выраженности воспаления в стенке желчного пузыря у больных хроническим калькулезным холециститом.

 

В настоящее время начало хронического некалькулезного холецистита связывают с развитием асептического воспаления в слизистой оболочке желчного пузыря (ЖП) [2].

Не вызывает сомнения тот факт, что некалькулезный холецистит представляет собой начальную стадию калькулезного холецистита, то есть еще до развития камней в желчном пузыре уже обнаруживаются литогенные свойства желчи [1].

Циклооксигеназа-2 (ЦОГ-2) вовлечена в воспалительный ответ при хронических холециститах [10].

Повышение экспрессии циклооксигеназы-2 обнаружено в препаратах ЖП, полученных после холецистэктомии (ХЭ) при хронических холециститах, а также при экспериментальном остром холецистите [5,6,7,11]. Степень экспрессии циклооксигеназы-2 в строме ЖП при хроническом холецистите значительно выше, чем в норме [6].

При анализе современной литературы нам не встретилось исследований, посвященных уровню экспрессии ЦОГ-2 в зависимости от выраженности воспаления при хронических холециститах.

Исходя из вышеизложенного, целью нашего исследования явилось изучить уровень экспрессии циклооксигеназы-2 в зависимости от степени выраженности воспаления в стенке желчного пузыря у больных хроническим калькулезным холециститом (ХКХ).

 

Материалы и методы исследования.

Проводили гистологическое исследование (n=52) и иммуноморфологическое исследование (n=21) стенки желчных пузырей, полученных во время холецистэктомии у больных ХКХ. Кроме того, была обследована контрольная группа желчных пузырей (гистологическое исследование), полученных при аутопсии умерших от заболеваний, не связанных с патологией органов пищеварения (без наличия камней и признаков воспаления в желчном пузыре) (n=21).

Микроскопическое исследование стенки желчного пузыря проводилось после стандартной фиксации 10% нейтральным формалином и подготовки микропрепарата. Окраска гистологических препаратов проводилась гематоксилином-эозином и пикрофуксином по Ван-Гизону. Для количественного морфометрического изучения объектов и их подсчета была использована система компьютерного анализа цветового изображения «ВидеоТест – Морфо 4,0». Количественные измерения проводились в 3-х препаратах (дно, тело, шейка желчного пузыря) в 5 репрезентативных полях со стандартной измерительной рамкой при увеличениях х50, х100, х200 и х400. При исследовании препаратов проводилась количественная оценка следующих параметров: 1. Количество клеточных элементов воспаления в поле зрения; 2. Лимфо-плазмацитарный индекс; 3. Среднее число нейтрофилов в поле зрения; 4. Среднее число эозинофилов в поле зрения; 5. Среднее число плазматических клеток в поле зрения. Кроме того, полуколичественно определяли интенсивность воспалительного инфильтрата, наличие острого или хронического воспаления, метаплазии, воспаление в синусах Рокитанского-Ашоффа, наличие очаговой и диффузной лимфоцитарной инфильтрации стромы слизистой оболочки.

Иммуноморфологическое исследование проводили по протоколу DakoCytomation с первичным моноклональным антителом Cyclooxygenase-2 (Novocastra). Экспрессию циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2) в стенке желчного пузыря оценивали полуколичественно.

Статистическую обработку проводили, используя программу Statistica 6 for Windows. Достоверность различий определяли по критерию u-Манна-Уитни. Изучение статистических связей между показателями выборки проводили с помощью корреляционного анализа. Направление корреляционной связи оценивали по знаку коэффициента корреляции Спирмена (rs). Показатели считали значимыми при p<0.05.

 

Результаты и их обсуждение.

При гистологическом исследовании стенки желчного пузыря после холецистэктомии у больных ХКХ (n=52) преобладали: 1) слабо выраженные (52% - в дне, 56% - в шейке, 46% - в теле) и умеренно выраженные признаки хронического воспаления (40% - в дне, 29% - шейке, 56% - в теле); 2) очаговая лимфоцитарная инфильтрация стромы слизистой оболочки желчного пузыря (79%); 3) диффузная лимфоцитарная инфильтрация стромы слизистой оболочки желчного пузыря (21%); 4) умеренно выраженная атрофия слизистой оболочки ЖП (44% - в дне, 52% - в шейке, 48% - в теле); 5) умеренно выраженный склероз стенки (54% - в дне, 52% - в шейке, 58% - в теле); 6) умеренно выраженная гипертрофия мышечного слоя (44% - в дне, 56% - в шейке, 44% - в теле); 7) метаплазия по желудочному типу (29% - в дне, 25% - в шейке, 29% - в теле). Все приведенные гистологические изменения значимо различались по сравнению с контрольной группой (р<0.05). Наши результаты согласуются с данными литературы [1, 2, 3, 4).

Количество клеточных элементов в поле зрения: в дне – 32.0 (23.0-48.5) (р<0.05, по отношению к контролю), в шейке – 28.0 (15.5-50.0) (р<0.05), в теле – 33.0 (22.0-50.0) (р<0.05) (рис.1).

Лимфо-плазмацитарный индекс составил 9/1 (р<0.05).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Повышенная экспрессия ЦОГ-2 в стенке ЖП, полученных после ХЭ от  больных ХКХ (n=21) была определена в 81% в эпителиальных клетках, в 86% – в гладкомышечных, в 57% – в стромальных клетках, в 71% – в стенках сосудов, в 37% – синусах Рокитанского-Ашоффа (рис. 2).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


При интенсивности воспале­нии в стенке ЖП слабой степени (n=12) повышенная экспрессия ЦОГ-2 обнаружена в эпителии - 83%, в гладко-мышечных клетках – 75%, в стромальных – 33%, в стенке сосудов – 78%, в синусах Рокитанского-Ашоффа – 17%. В группе, включающей более выраженную степень воспаления (умеренную и резкую, n=9), повышенная экспрессия ЦОГ-2 была оп­ределена в эпителиальных клетках - 78%, в гладкомышечных - 100%, в стромальных клетках - 78%, в стенках сосудов - 89%, в синусах Рокитанского-Ашоффа - 67%. Выявлена положительная корреляция между выраженностью воспаления в стенке ЖП и выраженностью экспрессии ЦОГ-2 в гладкомышечных клетках (rS= +0.71, p<0.001) и стенках сосудов (rS= +0.51, p<0.05) (рис.3, рис.4).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


В группе желчных пузырей, имеющих желудочную метаплазию слизи­стой оболочки (n=8), повышенная экспрессия ЦОГ-2 была определена: в эпителиальных клетках – 100%, в гладкомышечных – 87%, в стромаль­ных – 63%, в стенках сосудов – 75%, в синусах Рокитанского-Ашоффа – 37%.

В этой группе обнаружена корреляция между интенсивностью воспаления и выраженностью экспрессии ЦОГ-2 в стромальных клетках (rS= +0.72, p<0.05).

При исследовании желчных пузырей без метаплазии (n=13) по­вышенная эспрессия ЦОГ-2 обнаружена в эпителиальных клетках – 69%, в гладкомышечных – 85%, в стромальных – 54%, в стенках сосудов – 69%, в синусах Рокитанского-Ашоффа – 38%.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Интенсивность воспаления в стенке ЖП зависела от экспрессии ЦОГ-2 в гладкомышечных клетках (rS= +0.82, p<0.001) в этой группе (рис.5).

Повышение экспрессии ЦОГ-2 обнаружено также другими авторами в эпителиальных и стромальных клетках препаратов ЖП, полученных после ХЭ при острых и хронических холециститах, а также в гладкомышечных клетках при экспериментальном остром холецистите [6,7,8].

Мы не встретили указаний на повышенную экспрессию ЦОГ-2  в стенках сосудов и в синусах Рокитанского-Ашоффа.

На модели острого и хронического холециститов продемонстрировано, что увеличение освобождения простагландинов PGE2, 6-keto-PGF1-alpha в мышечных клетках, вызванное увеличением синтеза ЦОГ-2, приводит к воспалению в желчном пузыре [8] и блокируется селективными ингибиторами ЦОГ-2 [10]. В эксперименте показано, что количество рецепторов к холецистокинину уменьшается, а к PGE2, напротив, повышается при остром холецистите [12].  Холецистокинин подавляет освобождение PGE2 [9].

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Учитывая выше сказанное, повышение экспрессии ЦОГ-2 в эпителиальных клетках может быть причиной нарушения абсорбционной функции, в гладкомышечных клетках – снижения моторики желчного пузыря, то есть повышенная экспрессия в указанных клетках может быть причиной хронического «мягкого» внутрипузырного холестаза. Повышенная экспрессия  в гладкомышечных клетках, эпителиальных клетках и стенках сосудов может быть причиной развития хронического асептического воспаления стенки желчного пузыря.

Выводы.

1.    Повышенная экспрессия ЦОГ-2 в гладкомышечных клетках, эпителиальных клетках и стенках сосудов может быть причиной хронического асептического воспаления, хронического «мягкого» внутрипузырного холестаза и гипомоторной дисфункции желчного пузыря.

2.    Избыточная экспрессия ЦОГ-2 в эпителиальных клетках может быть  важным патогенетическим  звеном воспалительно-метапластического процесса.

 

Литература

1.                    Галкин В. А. Хронический некалькулезный холецистит. - М.: Медицина, 1986. - 128 с.

2.                    Ильченко А.А. Хронический бескаменный холецистит // Consilium medicum. – 2005. – Т. 7, № 6. – С. 456– 459.

3.                    Тюрюмин  Я. Л. Закономерности морфо-фукциональных нарушений в желчном пузыре и печени в патогенезе холестериного холелитиаза: Дисс. …д-ра мед. наук. – Иркутск, 2000. – 258 с.

4.                    Шапочников А. В. Холецистит. Патогенез, диагностика и хирургическое лечение. – Ростов на Дону: Издательство Ростовского университета, 1984. – 224 с.

5.                    Fumino S., Tokiwa K., Ono S. et al. Сyclooxygenase-2 expression in the gallbladder of patients with anomalous arrangement of pancreatobiliary duct // J. Pediatr. Surg. – 2003. – Vol. 38, № 4. – P. 585–589.

6.                    Ghosh M., Kawamoto T., Koike N. et al. Cyclooxygenase expression in the gallbladder // Int. J. Mol. Med. – 2000. – Vol. 6, № 5. – P. 527–532.

7.                    Longo W. E., Panesar N., Mazuski J. E.  et al. Synthetic pathways of gallbladder mucosal prostanoids: the role of cyclooxygenase-1 and 2. / // Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. – 1999. – Vol. 60, № 2. – P. 77–85.

8.                    Myers S. I., Bartula L. I., Colvin M. P. et al. Bile duct ligation induced acute inflammation up-regulates cyclooxygenase-2 content and PGE2 release in guinea pig gallbladder smooth muscle cell cultures // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. – 2005. – Vol. 72, №5. – P. 327–333.

9.                    Myers S.I., Bartula LL, Colvin M.P.  et al. Cholecystokinin (CCK) down regulates PGE2 and PGI2 release in inflamed Guinea pig gallbladder smooth muscle cell cultures// Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. – 2005. – Vol. 73, № 2. – P. 121–126.

10.                Nilsson B., Delboro D., Hedin L. et al. Role of cyclooxygenase-2 for fluid secretion by the inflamed  gallbladder mucosa //J. Gastrointest Surg. –1998. - Vol. 2, № 3. – P.269–277. 

11.                Orellana M., Rodrig R., Thielemann L.  et al. Bile duct ligation and oxidative stress in the rat effects in liver and kidney // Соmp. Biochem. Physiol. Toxicol. Pharmacol. – 2000. – Vol.126, № 2. – P. 105–111.

12.                Xiao Z.-L., Chen Q., Biancani P. et al. Abnormalities of gallbladder muscle associated with acute inflammation in guinea pigs // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. – 2001. – Vol. 281. – P. G490–497.