*112483*

Зыкова Е.В., Дудченко Г.П., Островский О.В.

Волгоградский государственный медицинский университет, Россия

Анализ аскорбиновой кислоты в лекарственных препаратах растительного происхождения с использованием мицеллярной электрокинетической хроматографии.

В последние годы значительно возрос интерес к препаратам растительного происхождения, которые на сегодняшний день составляют 1/3 всего реестра ЛП на международном фармацевтическом рынке (по материалам www.europa.eu, www.independent.co.uk). Одним из распространенных видов растительного сырья, стандартизацию которого проводят по аскорбиновой кислоте (АК), являются плоды шиповника. Плоды шиповника используются для изготовления поливитаминных сборов, сиропа, экстракта шиповника для препарата "Холосас" гранул сухого экстракта. Объектом нашего изучения являлся ЛП «Сироп плодов шиповника», в состав которого входит экстракт шиповника, кислота аскорбиновая, сироп сахарный не менее 50% и натрия бензоат. Стандартизации этого ЛП проводится по АК, поскольку она имеет ключевое значение, являясь основным действующим веществом, а высокое содержание сахаров, затрудняет процесс анализа рутинными методами.

Согласно рекомендациям ГФ, в растительных препаратах анализ АК проводится объемным титриметрическим методом с 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия (ДХФИФ), с которым могут взаимодействовать и другие соединения (углеводы, флаваноиды) для которых характерны восстановительные свойства [1]. Для некоторых интерферирующих веществ существуют способы снижения их влияния, однако, в целом, метод с 2,6-ДХФИФ характеризуется высокой ошибкой определения КА в составе многокомпонентных растительных образцов.

Поэтому на сегодняшний день, все большее внимание уделяется современным электросепарационным методам анализа, которые позволяют с высокой степенью точности и чувствительности количественно определить содержание вещества в присутствии сопутствующих соединений. Одним из таких методов является капиллярный электрофорез (КЭ). Метод может служить альтернативой высокоэффективной жидкостной хроматографии, которая в широко используется Европейской Фармакопеей в анализе растительного сырья [2].

Целью настоящей работы явилось количественное определение кислоты аскорбиновой в сиропе плодов шиповника с использованием методики мицеллярной электрокинетической хроматографии, как одного из вариантов КЭ.

В работе использовали систему фирмы Agilent Technologies (G1602A) с кварцевым капилляром диаметром 50 мкм и общей длиной 40 см. Мобильная фаза представляла собой смесь 25 мМ раствора тетрабората натрия и 50 мМ раствора SDS (додецилсульфат натрия). Анализ проводили при температуре 25ºС и напряжении +20 кВ. Вещества детектировали спектрофотометрически при длине волны 254 нм. Объектом исследования являлся сироп плодов шиповника (ОАО «Фармстандарт-УфаВИТА», Россия).

Необходимый объем сиропа растворяли в небольшом количестве воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, тщательно перемешивали и доводили объем раствора очищенной водой до метки, полученный раствор фильтровали, затем центрифугировали в течение 3 мин при скорости вращения 5000 об/мин.

Для количественной оценки строили градуировочный график зависимости отношения площади пика (mAu*s) КА к площади пика внутреннего стандарта пара-аминобензойной кислоты (ПАБК) от концентрации раствора КА. За результат анализа принимали среднеарифметическое значение двух параллельных измерений.

Статистическую обработку данных проводили по ГФ XI [2], использую программу Microsoft Excel, в соответствии с требованиями ОФС «Валидация фармакопейных методов».

Предварительно по субстанции АК была проведена валидационная оценка используемой методики (диапазон линейности составил 0,05-1 мМ; r² = 0,9989; RSD(%) = 1,85; R(%) = 98,5-101,8), специфичность методики оценивалась с помощью соответствия электрофоретических подвижностей и UV-VIS спектра пика АК (Рис.1), которые в дальнейшем использовались для идентификации пиков АК в реальных образцах.

А.	Б.

Рисунок 1. Спектры пика АК стандартного раствора (А), реальной пробы (Б).

При указанных параметрах нам удалось получить хорошее разделение и четкие пики АК и ПАБК в реальных образцах (Рис 2).

Рисунок 2. Электрофореграмма сиропа плодов шиповника (внутренний стандарт ПАБК)

Результаты количественного содержания АК в сиропе плодов шиповника, полученные с использованием методики КЭ, представлены в таблице 1.

Таблица 1.

№	Отношение площади пиков АК/ПАБК	г/л	№	Отношение площади пиков АК/ПАБК	г/л
1	0,82	3,99	6	0,82	3,97
2	0,81	3,95	7	0,89	4,09
3	0,87	4,19	8	0,83	4,03
4	0,86	4,14	9	0,85	4,13
5	0,84	4,08	10	0,83	4,01
Среднее значение, г/л			4,06
CV, %			1,96
Содержание АК в препарате по данным НД производителя, г/л			не менее 4,0

Полученные в результате анализа данные о содержании АК сопоставимы данными НД производителя этого ЛП и характеризуются низким значением коэффициента вариации. Таким образом, методика капиллярного электрофореза при указанных нами условиях проведения, может быть использована для определения АК в сиропе плодов шиповника и как следствие, в многокомпонентных растительных образцах. В качестве внутреннего стандарта следует применять ПАБК.

Литература

1. Государственная фармакопея СССР XI. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное сырье. МЗ СCСР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина. - 1990. – 400 с.

2. European Pharmacopoeia. Third Edition. Supplement 2001. Published in accordance with Convection on the Elaboration of a European Pharmacopoeia.- Strasbourg: Council of Europe, 2000.