*113022*

УДК 618.15-002-085.28.37.454.1:547.854.4:615.014.41.076

ИЗУЧЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ КОНСЕРВАНТОВ в вагинальном геле

Федотова А.А., Аюпова Г.В.

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет», Уфа

Совершенствование медицинской помощи женщинам с инфекциями урогениталиев является одной из важных медицинских проблем, актуальность которой обусловлена высоким уровнем и постоянным ростом заболеваемости, хроническим течением инфекционного процесса и его недостаточно эффективной терапией [1]. Бактериальный вагиноз (БВ), характеризующийся усиленным ростом преимущественно облигатно-анаэробных бактерий и резким снижением концентрации лактобактерий, составляет 30–50% от общей заболеваемости вульвовагинальными инфекциями [2, 3].

Общеизвестно, что бактериальный вагиноз сопровождается нарушениями в системе местного иммунитета (уменьшение концентрации IgA, sIgA, IgG и увеличение концентрации IgM, дисфункция нейтрофилов вагинального содержимого). Нарушения в системе общего иммунитета заметны лишь при длительнотекущем заболевании (более 5 лет) [6].

Учитывая наличие местного иммунодефицита у таких больных, перспективно использование иммуномодуляторов для интравагинального применения. Наибольший интерес представляют те препараты, иммуномодулирующее действие которых обусловлено несколькими механизмами действия. Такое поливалентное действие характерно для пиримидинов, и в частности, для оксиметилурацила, обладающего иммуностимулирующим, противовоспалительным, анаболическим, антиоксидантным и репаративным свойствами [4].

Нами разработан иммуномодулирующий гель оксиметилурацила для вагинального применения для коррекции местного иммунитета у больных с бактериальным вагинозом.

Для обеспечения качества лекарственной формы при хранении, необходимо подобрать консервант и его концентрацию. Часто в качестве консервантов для гелей используются парабены – нипагин и нипазол в различных соотношениях. Нами выбрана концентрация консерванта 0,2 %, соотношение нипагин-нипазол 1:1 и 4:1.

Испытания проводили в соответствии с методикой, рекомендованной ГФ XII изд., ч. 1, стр. 216-219, статья «Определение эффективности антимикробных консервантов лекарственных средств» ( ОФС 42-0069-07). Антимикробное действие консервантов определяли в отношении некоторых видов бактерий и грибов: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans. Результаты представлены в таблицах 1 и 2.

Табл. 1 Количество клеток тест-микроорганизмов в 1 мл вагинального геля

Тест-микроорганизмы	нипагин:нипазол 4:1			нипагин:нипазол 1:1
	исх.	14 дн.	28 дн.	исх.	14 дн.	28 дн.
E. coli	14·10^3	4·10^2	10	15·10^3	2·10^2	10
S. aureus	16·10^3	0	0	16·10^3	3·10^2	10
P. aeruginosa	9·10^3	3·10^2	20	1·10^4	2·10^2	20
C. albicans	3·10^2	0	0	4·10^2	0	0

Табл. 2 Антимикробная активность консервантов в вагинальном геле

Критерии оценки эффективности антимикробных консервантов	Нипагин:нипазол 4:1			Нипагин:нипазол 1:1
	Вид тест-микроорганизма
	E. coli	S. aureus	P. aeruginosa	E. coli	St. aureus	Ps. aeruginosa
Уменьшение логарифма числа бактерий в 1 мл через 14 сут. должно быть не менее, чем на 2	lg35	отсутств. тест- микроорга-низма	lg30	lg75	lg53	lg50
С 14 до 28 сут. не должно быть увеличения числа бактерий	снижение числа бактерий	отсутств. тест- микроорга-низма	снижение числа бактерий			нет увеличения числа бактерий
Через 14 и 28 сут не должно быть увеличения числа грибов	C. albicans			C. albicans
	нет увеличения числа грибов

Из результатов исследования видно, что консерванты нипагин и нипазол в соотношениях 4:1 и 1:1 обеспечивают необходимый уровень противомикробной и противогрибковой активности и соответствуют требованиям ГФ XII изд. ОФС 42-0069-07 «Определение эффективности антимикробных консервантов лекарственных средств», категория 2.

С целью оптимизации технологии выбрано соотношение консервантов нипагин:нипазол 1:1.

При стандартизации полученного иммуномодулирующего геля мы проводили количественное определение парабенов методом тонкослойной хроматографии. В качестве экстрагентов использовали муравьиную кислоту и метанол, обеспечивающие эффективную экстракцию парабенов из лекарственной формы. Четкое деление между пятнами на хроматограмме достигалось использованием системы элюентов петролейный эфир: хлороформ: ледяная уксусная [5].

В стакан вместимостью 50 мл вносили навеску геля массой 1,0 г, приливали 0,5 мл муравьиной кислоты и 9,5 мл метанола и встряхивали на протяжении 1 мин. Экстракт оставляли на ночь. На пластинку для ТСХ (Sorbfil) наносили 10 мкл пробы эсследуемого экстракта. Рядом для создания шкалы сравнения наносили 2, 3, 4, 5 и 6 мкл раствора, содержащего 0,025 % нипагина и 0,025 % нипазола (концентрация парабенов 0,05 %) и компоненты элюента (петролейный эфир: хлороформ: ледяная уксусная кислота в соотношении 20:6:2,5). После развития хроматограммы сравнивали интенсивность пятен пробы с пятнами шкалы сравнения.

Приготовление раствора стандартного образца (РСО), содержащего нипагина 0,025 %, нипазола 0,025 % (1:1). По 0,0025 г нипагина и нипазола (точные навески) помещают в сухую коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 7 мл петролейного эфира, 2,1 мл хлороформа, 0,9 мл ледяной уксусной кислоты и перемешивают. 1 мкл РСО содержит по 250 нг нипагина и нипазола.

Интенсивность пятен пробы идентична интенсивности пятен 4 шкалы сравнения (рис. 1). Отсюда содержание парабенов в нанесенной пробе соответствует 2000 нг, а массовая доля консервантов в вагинальном геле равна 0,2 %. Интенсивность пятен метилпарабена и пропилпарабена исследуемой пробы 3 соответствует интенсивности пятен раствора 4, что подтверждает соотношение консервантов нипагин:нипазол в лекарственной форме 1:1.

Рис. 1. – Схема хроматограммы контроля содержания парабенов в вагинальном геле путем сравнения со стандартной шкалой: 3 - проба, 1-2 и 4-6 – стандартные растворы, содержащие нипагин и нипазол в соотношении 1:1 суммарно 1000 нг (1), 1500 нг (2), 2000 нг (4), 2500 нг (5), 3000 нг (6).

В ходе исследований установлено оптимальное соотношение консервантов в лекарственной форме 1:1. Методом тонкослойной хроматографии подтверждены концентрация парабенов и соотношение нипагин:нипазол в вагинальном геле с оксиметилурацилом.

Список литературы:

1. Серов, В.Н. Микробиоценоз влагалища и инфекционные вульвовагиниты: выбор препарата для рациональной терапии / В.Н. Серов, С.А. Шаповаленко // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. – 2004. - Т. 3, № 4. – с. 27-31.

2. Анкирская, А.С. Бактериальный вагиноз // Акушерство и гинекология.- 1995.- №6.- с. 13-16.

3. Гомберг, М.А. Терапия трихомониаза и бактериального вагиноза: проблемы и пути решения // Consilium medicum, 2005, том 7, №3, с. 210-214.

4. Лазарева, Д.Н. Иммурег / Д.Н. Лазарева и др..- Уфа, 2004,- 103 с.

5. Логинова, Л.П. Контроль содержания n-гидроксибензойной кислоты и парабенов в косметических средствах методом мицеллярной тонкослойной хроматографии / Л.П. Логинова, Д.В. Едаменко, А.Ю. Куликова и др. // Вiсник Харькiвского нацiонального Унiверситету 2006.- № 731. – Хiмiя. Вип. 14(37). – с. 127-134.

6. Олина, А.А. Папилломавирусная инфекция гениталий и бактериальный вагиноз / А.А. Олина, В.М. Падруль // Фарматека. - 2007. №1 с. 49-54