*111119*

Медицина 8. Морфология

к.м.н. Горчакова О.В., д.м.н. Горчаков В.Н.

ФГБУ «НИИ клинической и экспериментальной лимфологии» СО РАМН, Новосибирский государственный университет, Россия

Оценка жидкостной составляющей лимфатического узла в разные возрастные периоды и в условиях озоно- и фитокоррекции

В структурном оформлении межтканевых взаимоотношений на уровне лимфатического узла важной является жидкостная составляющая, складывающаяся из тканевой жидкости между клетками и волокнами, лимфы, циркулирующей по синусам, крови в сосудах. Жидкость (водная среда) – это необходимый субстрат каждого органа, позволяющий выполнять ему его функции. Направленность и интенсивность движения лимфы регламентированы конструкцией лимфатического узла, который претерпевает существенные изменения в зависимости от возраста (Альтман Д.Ш. и др., 2003; Сененко А.Ш., 2003; Топорова С.Г. и др., 2003, 2007). Основная трудность здесь заключается в определении величины жидкостного обмена. Эта величина является интегральным показателем. От нее зависит дренажно-детоксикационная деятельность лимфатического узла. Поэтому интенсивность и направленность жидкостного обмена входят в число основных критериев прогноза и эффективности функционирования лимфатического узла с учетом возраста.

Цель исследования – оценить жидкостную составляющую лимфатического узла в зависимости от его структурной организации с учетом возрастных изменений.

Материал и методы исследования. Опыты проведены на 160 беспородных белых крысах-самцах разного возраста (4-6 месяцев и 12-15 месяцев). Животные получали при свободном доступе к воде стандартную диету (экструдированный комбикорм ПК-120-1). Эксперимент проведен в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и в соответствии с приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.

В эксперименте использован биоактивный фитосбор (БАФ), включающий корень и лист бадана, родиолу розовую, копеечник сибирский, лист черники, брусники, смородины, шиповник майский, чабрец, пищевые волокна. Фитосбор применялся в течение одного месяца в суточной дозе 0,1-0,2 г/кг у животных разного возраста. Выбор конкретных лекарственных растений основан на принципах фитотерапии (Корсун В.Ф. и др., 1995; Кортиков В.Н. и др., 1998; Горчаков В.Н. и др., 2002).

Наряду с приемом фитосбора осуществлялась озонаппликация на область лимфосбора паховых лимфатических узлов посредством озонированного оливкового масла по 15-20 минут через день, на курс 14 процедур. Насыщение оливкового масла озоном производилось аппаратом ОП1-М с устройством для озонирования. Лимфотропная терапия путем озонаппликаций дает положительные результаты, что обосновывает правомерность использования ее в медицинской практике (Арефьева И.С. и др., 2007).

Исследовали регионарные паховые лимфатические узлы, которые являются «сторожевыми» для территории задней конечности и генитальной области. Изучение осуществляли в соответствии с требованиями к гистологическому исследованию лимфатических узлов (Cottier H. et al., 1973; Белянин В.Л. и др., 1999). Забранные лимфатические узлы фиксировали в 10% нейтральном формалине. Далее следовала классическая схема проводки и заливки материала в парафин с последующим приготовлением гистологических срезов. Гистологические срезы лимфатических узлов окрашивали гематоксилин-эозином и азур-эозином. Морфометрический анализ структурных компонентов лимфатического узла осуществляли с помощью морфометрической сетки случайного шага (Автандилов Г.Г., 1990), которая накладывалась на срез лимфатического узла. Подсчитывалось количество узлов или пересечений сетки, приходящихся на весь срез в целом и раздельно на каждый из структурных компонентов с перерасчетом в проценты.

Количество общей жидкости определяли как разность результатов двух взвешиваний лимфатического узла сырой массы и постоянной массы, достигнутой просушиванием образца при t°=102°С. Количество связанной воды вычисляли, как разность между количеством общей и количеством свободной жидкости. Свободная вода включала лимфу синусов и тканевую жидкость. Общий объем жидкости в лимфатическом узле складывается из объема внеклеточной жидкости, включающей лимфу синусов, кровь в кровеносных сосудах, тканевая жидкость и объема внутриклеточной жидкости. Зная объем лимфатического узла, его площадь и площади структур, можно рассчитать объем жидкости, приходящийся на ту или иную структуру лимфатического узла в соответствии с принципом A. Delesse (1847) и А.А. Глаголева (1941). В работе определяли величину плотности (r) по формуле: r = m/V, где m – масса в мг, V – объем в мм³ лимфатического узла.

Статистическая обработка полученных данных осуществлялась при помощи компьютерных программ Image-Pro Plus 4.1, StatPlus Pro 2009, AnalystSoft Inc. (Васильева Л.А., 2004).

Результаты исследования. Результаты исследования показали, что содержание жидкости в лимфатическом узле различается в разные возрастные периоды (табл. 1). У молодых общий объем жидкости в лимфатическом узле поддерживается стабильно: он колеблется в пределах 38,43-43,9 мм³ без коррекции и после нее. У геронтов в лимфатическом узле наблюдается уменьшение на 11,16% общей воды в сравнении с молодыми животными. Это отражает общую тенденцию в уменьшении водной среды в организме с возрастом. Обращает внимание, что применение озоно- и фитокоррекции не вызывает существенных изменений в объеме водной среды лимфатического узла у молодых животных. Компенсаторные возможности лимфатического узла молодых животных достаточно высоки, из-за этого не возникает дефицита или избытка жидкости при действии озоно- и фитосредств. В тоже время применение озоно- и фитокоррекции у старых животных, имеющий дефицит жидкости, приводит к депонированию в пределах 3-4% жидкости (воды) в лимфатическом узле в сравнении с исходным уровнем (табл. 1). При озонаппликации и приеме фитосбора достигается эффект лимфостимуляции, который носит превентивный характер. У геронтов величина общей воды в лимфатическом узле колеблется в пределах 22,7-24,98 мм³, оставаясь ниже аналогичных показателей молодых животных, несмотря на лимфостимуляцию.

Таблица 1.

Количество общей воды в лимфатическом узле у молодых и геронтов

в условиях озон- и фитокоррекции, %

Молодые			Геронты
Без коррекции	Озон- аппликация	БАФ + озонаппликация	Без коррекции	Озон- аппликация	БАФ + озонаппликация
1	2	3	4	5	6
83,8±0,81	83,60±0,90	83,5±0,58	74,45±0,82°	77,63±0,61*°	76,36±0,88°
Примечание: *P1-2,3; 4-5,6 < 0,05 °P1-4; 2-5; 3-6 < 0,05

Рис. 1. Взаимосвязь объема жидкости с корково-мозговым соотношением (индекс К/М) в лимфатическом узле молодых животных в условиях озонаппликации и приема биоактивного фитосбора (БАФ)

Одной из главных характеристик лимфокомпоненты лимфатического узла является его пропускная способность, которая зависит от особенностей его структурной организации. Критерием оптимальности организации лимфатического узла является корково-мозговое соотношение (индекс К/М), которое определяет его функциональное соответствие потребностям дренируемой области органа. Объем общей воды в лимфатическом узле связан со структурой лимфатического узла, прежде всего, с корково-мозговым соотношением и определяется развитием мозгового вещества. Между объемом жидкости и корково-мозговым соотношением имеет место обратная связь высокой степени. Коэффициент корреляции у молодых животных составляет 0,87-0,88, а у геронтов – 0,79-0,93. У молодых животных на величину коэффициента корреляции не оказывает существенного влияния озоно- и фитокоррекция. Но при сочетанном воздействии озоно- и фитотерапии происходит изменение формы кривой (рис. 1), демонстрирующей увеличение водной составляющей в лимфатическом узле при более высоких значения корково-мозгового индекса.

У старых животных имеет место повышение почти в 1,2 раза коэффициента корреляции в условиях приема озоно- и фитотерапии. При этом у старых животных наблюдается смещение кривой вправо на графике, отражающей корреляцию между объемом жидкости и корково-мозговым соотношением (рис. 2). Это указывает на изменение условий циркуляции жидкости внутри лимфатического узла, связанное с возрастом в условиях озоно- и фитокорекции. Происходит сохранение увеличенного объема жидкости при возрастании коркового-мозгового индекса лимфатического узла на фоне озоно- и фитотерапии.

Рис. 2. Взаимосвязь объема жидкости с корково-мозговым соотношением в лимфатическом узле старых животных в условиях озонаппликации и приема биоактивного фитосбора (БАФ)

Наблюдаемая компактизация лимфатического узла при увеличении коркового-мозгового соотношения, сопровождается изменением его плотности (табл. 2). Расчеты показали, что величина плотности зависит от возраста и структурных изменений в лимфатическом узле. Величина плотности наименьшая у молодых животных. Имеет место повышение плотности при приеме биоактивного фитосбора из-за свойств его усиливать компактизацию лимфатического узла. У геронтов величина плотности имеет высокую величину (~ 1,0) из-за уменьшения объема жидкости и увеличения клеточно-волокнистых элементов в лимфатическом узле. Прием фитосбора и озонаппликации не влияет на величину плотности лимфатических узлов геронтов. Полученные данные косвенно указывают на увеличение связанной воды в лимфатическом узле геронтов из-за повышенного содержания клеточно-волокнистых структур.

Таблица 2.

Плотность лимфатического узла в разные возрастные периоды в условиях озонаппликации и приема биоактивного фитосбора (БАФ), r, мг/мм³

Молодые			Геронты
Без коррекции	Озон- аппликация	БАФ + озонаппликация	Без коррекции	Озон- аппликация	БАФ + озонаппликация
1	2	3	4	5	6
0,33	0,30	0,56	1,02	0,93	1,11

Основная характеристика лимфатического узла складывается из развития синусной системы и способов соединения отдельных синусов между собой. Уместно обратить внимание на следующий факт, имеющий принципиальное значение для трактовки пространственной организации синусов лимфатического узла. Очевидно, что размеры синусной системы являются результатом предшествующего морфогенеза, в процессе которого складываются оптимальные структурные взаимоотношения между синусной системой и паренхимой. В лимфатическом узле часть транспортируемой жидкости (лимфы) сосредоточено в синусной системе, преимущественно в мозговом и субкапсулярном синусах. Объем жидкости в лимфатическом узле связан с величиной площади его синусов. Расчеты показали, что объем жидкости в синусах лимфатического узла составляет 5,06±0,41 мм³ у молодых животных. При озонаппликации и приеме фитосбора объем синусной лимфы колеблется от 4,15±0,47 мм³ до 5,93±0,61 мм³, не демонстрируя статистически значимого изменения показателей. Имеет место тенденция к увеличению объема жидкости в синусной системе при применении озонаппликации. У геронтов объем жидкости в синусной системе имеет величину 5,71±0,44 мм³, мало отличающееся от таковой молодых животных. Но средняя его величина выше у части животных. При озонаппликации на фоне приема биоактивного фитосбора наблюдается величина объема жидкости в синусной системе в пределах 3,54-3,20 мм³, что указывает на ее уменьшение у геронтов. В синусах сосредоточена свободная текучая жидкость – лимфа. Происходит нивелирование избыточности синусной системы и восстановление транспорта лимфы у геронтов в процессе озон- и фитокоррекции.

Рис. 3. Взаимосвязь объема жидкости с величиной субкапсулярного (Сс) и мозгового (Мс) синусов в лимфатическом узле молодых животных

Коэффициент корреляции демонстрирует высокую степень связи положительного характера между общим объемом жидкости и ее количеством в синусной системе лимфатического узла. Это очевидно: чем больше размер синусов, тем больше объем жидкости в лимфатическом узле. Обращает внимание, что у молодых животных увеличение размера синусов происходит при объеме жидкости, превышающим 80% (Рис. 3). В тоже время у старых животных увеличение размера синусов наблюдается при объеме жидкости меньше 80%, кривая на графике смещена в большей степени влево (Рис. 4). Предполагается, что объем жидкости в 80% является оптимально-критическим в лимфатическим узле, который не требует увеличения функции дренажных систем. При этом у старых животных данный объем меньше, который требует изменения размеров жидкостных компартментов лимфатического узла.

Рис. 4. Взаимосвязь объема жидкости с величиной субкапсулярного (Сс) и мозгового (Мс) синусов в лимфатическом узле старых животных

Большая часть свободно текущей жидкости приходится на межклеточную жидкость, которая фильтруется из синусов в паренхиму лимфатического узла. В лимфатическом узле молодых животных объем межклеточной жидкости составляет 69,1%, что обусловлено особенностями структурной организации пахового лимфатического узла, в котором преобладает корковое вещество. После озонаппликации отмечено уменьшение в 1,2 раза (на 18,6%) объема межклеточной жидкости в лимфатическом узле. Сочетанное применение озон- и фитокоррекции не изменило статистически значимо объем межклеточной жидкости у молодых животных. У геронтов значительно уменьшается в 2,2 раза объем межклеточной жидкости в лимфатическом узле. Объем межклеточной жидкости практически не меняется после озоно- и фитокоррекции у геронтов.

Заключение. Объем жидкостной составляющей лимфатического узла избирательно зависим от местных условий лимфотока, от возрастных изменений и от действия корригирующих факторов. С возрастом происходит уменьшение содержания жидкости в тканях организма. Не исключением является лимфатический узел. Изменение водного баланса связано с корково-мозговым соотношением лимфатического узла и наблюдаемой степенью его компактизации и развитием соединительной ткани. Применение озоно- и фитотерапии у молодых почти не меняет водный баланс, а у геронтов происходит увеличение жидкостной составляющей лимфатического узла. В последнем случае наблюдаемый эффект носит превентивный характер, но он важен для обеспечения дренажно-детоксикационной функции лимфатического узла, подверженного возрастным изменениям. Поддержание водного гомеостаза невозможно без участия лимфатической системы, где лимфатический узел является эффекторным органом. Следует признать, что регуляция водного обмена в лимфатическом регионе может быть достигнута применением озоно- и фитотерапии, что определяет целесообразность их более широкого применения в клинической практике.

Литература

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия / Г.Г. Автандилов. – М., 1990. – 384 с.

2. Альтман Д.Ш. Темпы старения и показатели иммунного статуса у участников современных войн / Д.Ш. Альтман, С.Н. Теплова, Н.Г. Кочеткова, М.Е. Солодянкина [и др.] // Альманах «Геронтология и гериатрия», 2003. – Вып. 2. – С.195-196.

3. Арефьева И.С. Эффективная терапия заболеваний, передающихся преимущественно половым путем (ЗППП) в амбулаторных условиях / И.С. Арефьева, А.В. Байбаков // Материалы III Международного конгресса «Эндоэкологическая медицина» и Первой международной школы «Эндоэкологической медицины». Республика Кипр, 21-28 октября 2007 г. – М.: ОАО «Щербинская типография», 2007. – С.29-30.

4. Белянин В.Л. Диагностика реактивных гиперплазий лимфатических узлов / В.Л. Белянин, Д.Э. Цыплаков. – Санкт-Петербург-Казань, 1999. – 328с.

5. Васильева Л.А. Статистические методы в биологии. Учебное пособие к курсу лекций «Биометрия». – Новосибирск: Институт цитологии и генетики СО РАН, 2004. – 127 с.

6. Горчаков В.Н. Фитолимфонутрициология / В.Н. Горчаков, Э.Б. Саранчина, Е.Д. Анохина // Научно-практ. журнал «Практическая фитотерапия», 2002. – № 2. – С.6-9.

7. Глаголев А.А. Геометрические методы количественного анализа агрегатов под микроскопом. – Львов, 1941. – 263с.

8. Корсун В.Ф. Фитотерапия экземы / В.Ф. Корсун, А.А. Кубанова, С.Я. Соколов. – Минск: «Навука i Тэхнiка», 1995. – 276с.

9. Кортиков В.Н. Лекарственные растения / В.Н. Кортиков, А.В. Кортиков. – М.: Рольф, Айрис-пресс, 1998. – 768 с.

10. Сененко А.Ш. Возрастные изменения скорости лимфатического дренажа / А.Ш. Сененко // Альманах «Геронтология и гериатрия». – М., 2003. – Вып. 2. – С.95

11. Топорова С.Г. Особенности системы околоклеточного гуморального транспорта при старении: обзор литературы / С.Г. Топорова // Альманах «Геронтология и гериатрия». – М., 2003. – Вып. 2. – С.90-94.

12. Топорова С.Г. Эндоэкологическая концепция противодействия преждевременному старению / С.Г. Топорова, Л.П. Свиридкина, С.А. Попова, О.И. Лопырева // Материалы III Международного конгресса «Эндоэкологическая медицина» и Первой международной школы «Эндоэкологической медицины». Республика Кипр, 21-28 октября 2007 г. – М.: ОАО «Щербинская типография», 2007. – С.23-24.

13. Cottier H. Предложения по стандартизации описания гистологии лимфатического узла человека в связи с иммунологической функцией / H. Cottier, J. Turk, L. Sobin // Бюлл. ВОЗ. – 1973. – С.372-377.

14. Delesse A. Procede mechanique pour determiner la composition des roches // Cr. hebd. Seanc. Acad. Sci., Paris, 1847. – V. 25. – P.544-545.