Функциональный полиморфизм гена IL2 при бесплодии, ассоциированном с генитальным эндометриозом

Агаркова Т.А., Наследникова И.О., Евтушенко И.Д., Кублинский К.С.

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российский Федерации

В структуре гинекологической заболеваемости эндометриоз занимает 3-е место после воспалительных процессов и миомы матки, поражая до 50% женщин с сохраненной менструальной функцией. При этом истинную частоту заболевания установить довольно трудно, поскольку, с одной стороны, диагноз можно поставить только интраоперационно, а с другой, у многих женщин оно протекает бессимптомно [1].

Эндометриоз приводит к функциональным и структурным изменениям в репродуктивной системе, стойкому болевому синдрому и бесплодию. По данным отечественных и зарубежных исследователей бесплодие при эндометриозе встречается в 30-60% случаев и является одним из основных симптомов проявления данной патологии [4, 2].

В патогенезе бесплодия, ассоциированного с генитальным эндометриозом, важная роль принадлежит нарушениям иммунного гомеостаза, в том числе и генетически обусловленным, предрасполагающим к определенному ответу иммунной системы на формирование эндометриоидных гетеротопий, их инвазию и распространение. В последние годы большое внимание уделяется изучению роли цитокинов в механизмах формирования эндометриоидных очагов [3, 5]. В связи с этим целью настоящего исследования явился анализ функционального полиморфизма гена интерлейкина (IL)-2 при эндометриозе в сочетании с бесплодием.

Материал и методы исследования. В исследовании приняли участие 135 пациенток репродуктивного возраста от 22 до 43 лет (средний возраст 30,6±1,2 года), которые были госпитализированы в гинекологическую клинику ГБОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России в 2009-2012 гг. для выполнения лечебно-диагностической и оперативной лапароскопии и гистероскопии. Показанием к оперативному вмешательству явилось бесплодие. Основную группу составили 92 пациентки (68%) с эндометриозом, страдающие бесплодием. Диагноз эндометриоза был поставлен в результате осмотра брюшины и органов малого таза на наличие эндометриоидных очагов в ходе эндоскопических методов исследования, с последующим гистологическим подтверждением. Группа сравнения была сформирована из 43 пациенток (32%) с бесплодием различной этиологии, которым была выполнена диагностическая лапароскопия и исключен генитальный эндометриоз. Лапароскопию и гистероскопию выполняли по стандартной методике с использованием аппаратуры фирмы «Karl Storz» (Германия).

Выделение ДНК из периферической крови проводили сорбентным методом согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Был исследован полиморфный вариант T-330G гена IL2, локализованый в промоторном участке гена и отвечающий за уровень экспрессии соответствующего цитокина, с использованием аллель-специфической полимеразной цепной реакции («ИнтерЛабСервис», Россия). Содержание IL-2 в сыворотке крови и перитонеальной жидкости оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа («Cytimmune», США).

Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по U-критерию Манна-Уитни. Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с заболеванием сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах женщин, используя критерий χ² с поправкой Йетса на непрерывность. Об ассоциации разных генотипов и аллелей с заболеванием судили по величине отношения шансов (odds ratio (OR)) с расчетом для него 95% доверительного интервала (CI).

Результаты исследования и их обсуждение. Бесплодие при эндометриозе обусловлено нарушениями в иммунной системе, которые могут опосредоваться несколькими путями. В перитонеальной жидкости у женщин с эндометриозом и бесплодием значительно повышен уровень ингибитора миграции макрофагов, что способствует росту гетеротопий. Сами гетеротопии секретируют специфические вещества, стимулирующие макрофагально-макроцитарную систему, в результате чего происходит изменение уровеня интерлейкинов, фактора некроза опухолей, факторов роста [2, 3, 4].

Провоспалительный IL-2 играет ключевую роль иммунном ответе, что связано с его способностью направлять дифференцировку наивных CD4+ T-лимфоцитов в Т-хелперы I типа (Th1) и регулировать интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа [3, 5]. В промоторной зоне гена IL2 известен полиморфизм T-330G, который относится к однонуклеотидным полиморфизмам и характеризуется заменой тиминового нуклеотида на гуаниновый [3].

В ходе иммуногенетического исследования было установлено, что у женщин с эндометриозом (44%) и пациенток без данной патологии (47%) чаще встречался гомозиготный по аллелю T генотип полиморфизма T-330G гена IL2. Обращало на себя внимание статистически значимое увеличение частоты генотипа GG полиморфного участка T-330G гена IL2 среди женщин с эндометриозом (χ²=1,46; р=0,05) относительно аналогичного показателя у женщин без эндометриоза. Кроме того, была показана положительная ассоциация генотипа GG (OR=1,65) и аллеля G (OR=1,30) полиморфного региона T-330G гена IL2 с бесплодием, ассоциированным с эндометриозом.

Исходя из того, что исследуемый полиморфизм T-330G гена IL2 расположен в промоторной области, нами была предпринята попытка выяснить характер влияния данного полиморфизма на уровень продукции кодируемого цитокина. Была выявлена значимая ассоциация между сниженным содержанием IL-2 в сыворотке крови (35,9 пг/мл, p=0,008) и перитонеальной жидкости (29,6 пг/мл, p=0,032) и генотипом GG полиморфизма T-330G гена IL2 у пациенток с эндометриозом, сочетанным с бесплодием.

Таким образом, показано, что аллельный полиморфизм T-330G гена IL2 оказывает влияние на уровень секреции IL-2. Наличие в генотипе женщины генотипа GG полиморфизма T-330G гена IL2 ведет к гипопродукции соответствующего белка, что способствует функциональному дефекту клеточного звена иммунной системы, что в свою очередь является фактором риска развития эндометриоз-ассоциированного бесплодия.

Литература:

1. Адамян Л.В., Кулаков В.И., Андреева Е.Н. Эндометриозы. – М.: Медицина. 2006. – 416 с.

2. Герасимов А. М. Причины бесплодия при наружном эндометриозе // Вестник акуш. гин. – 2008. – №1. – С.31-35.

3. Симбирцев А.С., Громова А.Ю. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления // Иммунология. – 2005. – №1. – С.67-72.

4. Allaire C. Endometriosis and infertility: a review // J. Reprod. Med. – 2006. – V.51.№3. – Р. 164-168.

5. Iwabe T., Harada T., Terakawa N. Role of cytokines in endometriosis-associated infertility // Gynec. Obstet. Invest. – 2002. – V.53.№1. – Р. 19-25.