Антонов М.П.¹, Жигулина В.В.²

¹ – Клинико-биохимическая лаборатория ООО «Вера»

² –Тверская государственная медицинская академия

ОСОБЕННОСТИ ПОВЕДЕНИЯ БЕЛКОВ МОЧИ И ПОЛОЖЕНИЕ ЛИЗОЦИМА МОЧИ ПРИ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ У БОЛЬНЫХ С ДИАБЕТИЧЕСКОЙ НЕФРОПАТИЕЙ И ХРОНИЧЕСКИМ ПИЕЛОНЕФРИТОМ

Развитие клинической медицины, молекулярной биологи и биохимии невозможно без разработки и совершенствования новых методов исследования: быстрых и точных методов диагностики. Несмотря на достаточно четко сформулированные критерии постановки диагноза при заболеваниях почек, в ряде случаев возникают затруднения в дифференциальной диагностике различных нефропатий. В последнее время в литературе появились работы, в которых сделаны попытки применения альтернативных способов дифференциации этих поражений. Сюда можно отнести работы по применению экскреции β-2-микроглобулина с мочой, электрофорез белков мочи с додецилсульфатом натрия, исследования электрофоретического поведения лизоцима мочи. Однако для ряда заболеваний данные, полученные с применением этих методов, либо отсутствуют, либо их количество недостаточно.

Целью настоящей работы явилось исследование расположения белковых фракций при электрофорезе мочи в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и электрофоретического поведение лизоцима мочи в полиакриламидном геле при диабетической нефропатии и хроническом пиелонефрите.

Диагноз заболевания устанавливался в лечебных отделениях больницы принятыми в настоящее время методами клинической, лабораторной и инструментальной диагностики. Из лабораторных методов обследования использовали общий анализ мочи, клинический анализ крови, определение общего белка, белковых фракций, электролитов (калия, натрия, хлоридов). Из инструментальных методов использовали ультразвуковое исследование почек, метод изотопной ренографии и рентгеноконтрастные методы исследования. Для анализа использовали разовую порцию мочи, собранную в утренние часы. В каждом образце проводили исследование белковых фракций мочи методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и определяли положение лизоцима мочи при электрофореге в полиакриламидном геле. Оценку результатов электрофореза мочи с додецилсульфатом натрия проводили качественно, по количеству белковых фракций и их подвижности. Подвижность полученных фракций оценивали путем измерения расстояния середины каждой полосы белка от старта, принимая подвижность альбумина за единицу. Оценку результатов электрофореза лизоцима мочи проводили по положению зон просветления ацетонового порошка Micrococcus lysodeicticus, добавленного в гель. Метод электрофореза белков с додецилсульфатом натрия известен с 1985 года и позволяет оценить селективность и тип протеинурии. Метод электрофоретического разделения лизоцима, предложенный в 1986 году, позволяет, по данным ряда авторов, быстро оценить уровень поражения почек (клубочки, канальцы), выявить почечную недостаточность и отдифференцировать заболевание.

Из результатов электрофореза белков мочи у больных с диабетической нефропатией видно, что во всех случаях обнаружен альбумин, степень выраженности фракций от небольшой, до хорошо выраженной. В трех случаях имеются белковые фракции с подвижностью меньшей, чем подвижность альбумина в количестве от 1 до 4. В одном случае были обнаружены преальбумины. В гелях, соответствующих электрофорезу лизоцима мочи, выявлено наличие зоны лизиса тест-микробов в виде полосы просветления в анодной части геля. Кроме того, в одном случае имеется дополнительная полоса в анодной части геля.

Картина расположения белковых фракций при электрофорезе белков мочи у больных хроническим пиелонефритом имеет следующие особенности: во всех случаях полоса альбумина достаточно хорошо выражена. В четырех случаях имеются белковые фракции с подвижностью меньшей, чем подвижность альбумина в количестве от 1 до 3. В четырех случаях обнаружены преальбумины в количестве больше 3 фракций. В гелях, соответствующих электрофорезу лизоцима мочи, больных хроническим пиелонефритом, обнаружено наличие зоны лизиса тест-микробов в виде полосы просветления в анодной части геля.

При сахарном диабете, осложненном нефропатией, поражение почек происходит на уровне клубочков, но без потери заряда клубочковой базальной мембраны. Исходя из литературных данных об уровне поражения нефрона при диабете, можно было ожидать катодное положение лизоцима, однако во всех случаях было зарегистрировано анодное положение лизоцима. Для окончательных выводов о механизме данного явления необходимо проведение дополнительных исследований.

Картина белковых фракций мочи при хроническом пиелонефрите соответствует описанной в литературе. При этом отличается наличием большого количества фракций преальбуминов, что характерно для нарушенной функции проксимальных отделов канальцев, приводящей к снижению реабсорбции белков, в основном низкомолекулярных. Лизоцим в случае хронического пиелонефрита был обнаружен во всех случаях и находился в анодном положении, что согласуется с данными литературы.

По мнению ряда авторов, преимущество метода электрофореза мочи состоит в том, что он позволяет достаточно быстро отдифференцировать различные нефропатии без применения биопсии.