Біологічні
науки / 8.Фізіологія людини і тварин
Єщенко Ю.В., Григорова Н.В., Гороховський Є.Ю.,
Бовт В.Д., Єщенко В.А.
Запорізький
національний університет
Вміст
цинку в В-інсулоцитах в залежності
від
їх функціонального стану
За допомогою цитохімічної реакції
8 – (п-толуолсульфоніламіно) – хіноліну (8-ТСХ) продемонстрована
присутність цинку в В-інсулоцитах [2].
У дослідах на золотистих хом’ячках було показано, що специфічний стимулятор секреції
інсуліну клітинами В острівців викликає зниження інтенсивності цієї реакції, а
при введенні алоксану, що вибірково пошкоджує вказані клітини, спостерігається
дефіцит у них цинку [1, 3, 4]. Подібні
досліди нами були проведені з
використанням кількісного методу визначення цинку в клітинах за допомогою мікрофлуоріметричного
методу.
У дослідах було використано 90 золотистих хом’ячків, серед яких були
контрольні (інтактні) тварини, а також хом’ячки, які отримали глюкозу та алоксан.
Для цитохімічного визначення цинку шматочки підшлункової залози фіксували
протягом 12 годин в холодному (4 ºС) ацетоні, проводили через ксилоли (по
15 хвилин у кожному), суміші 50 % ксилолу та 50 % парафіну (впродовж 30 хвилин
в при температурі 40 ºС), два рідкі парафіни (по 1,5 годин у кожнім при 56
°С) та заливали в парафін. Зрізи 5 – 10 мкм завтовшки депарафінували обробкою у
двох ксилолах (по 3 хвилини в кожному). На підсушені на повітрі зрізи наносили
0,01 % розчин 8 – ТСХ, потім їх промивали дистильованою водою, замикали в
гліцерин і розглядали під люмінесцентним мікроскопом (світлофільтри ФС–1, ЖС-18).
На препаратах у цитоплазмі В-клітин острівців визначали жовто-зелену
люмінесценцію, інтенсивність якої замірювали за допомогою мікрофлуориметра.
Калібрувальну криву будували на основі даних інтенсивності люмінесценції
у відносних одиницях (по вісі ординат) та стандартних розчинів комплексу 8-ТСХ
з цинком (по вісі абсцис).
На основі даних інтенсивності люмінесцентної реакції у клітинах по калібрувальній кривій відшукується
відповідне значення вмісту цинку в мкг/г стандартного розчину.
Для цитохімічного визначення інсуліну шматочки підшлункової залози
фіксували у рідині Буена (суміші
нейтрального формаліну, пікринової кислоти, оцтової кислоти) впродовж 24 годин,
потім проводили через спирти зростаючої міцності, ксилоли, суміш ксилолу та
парафіну, рідкі парафіни та заливали в парафін. Зрізи 5 – 10 мкм завтовшки
депарафінували витримуванням їх у ксилолах, спиртах понижувальної міцності,
дистильованій воді, окислювачі (суміші сірчаної кислоти та перманганату калію)
— до їх порудіння, відновнику (розчині щавлевої кислоти) — до знебарвлення.
Промиті у дистильованій воді зрізи забарвлювали 0,25 % спиртовим розчином
альдегідфуксину, промивали водопровідною
водою, замикали в гліцерин-желатин. На препаратах цитоплазма В-інсулоцитів була
забарвлена в синьо-фіолетовий колір.
Інтенсивність цитохімічної реакції альдегідфуксину оцінювали за трибальною
системою. За один бал приймали слабопозитивну, два бали - помірну, три бали –
виражену за інтенсивністю реакцію. Середню величину встановлювали підрахунком
на 100 клітинах.
У контрольних (інтактних) хом'ячків вміст
цинку в В-інсулоцитах складав 65 ± 5,2 мкг/г. Навантаження глюкозою викликало
зниження вмісту цинку в клітинах на 26 % (48 ± 3,4 мкг/г; р < 0,05). При
введенні алоксану концентрація цього металу в клітинах падала на 80 % (13 ± 0,5
мкг/г; р < 0,001)
Для вивчення зв'язку змін вмісту цинку та
інсуліну в панкреатичних клітинах В дані досліджень цього металу порівнювали з
результатами визначень інсуліну в даних клітинах. У контрольних (інтактних)
хом'ячків інтенсивність
цитохімічної реакції альдегідфуксину в В-клітинах складала 1,5 ± 0,10 ум.од. При
навантаженні глюкозою вміст інсуліну в цих клітинах був знижений на 20% (1,2 ±
0,07 ум.од.; р < 0,01). Алоксан викликав падіння концентрації інсуліну в
клітинах на 93 % (0,1 ± 0,02 ум.од.; р < 0,001).
Таким чином, кількість цинку в панкреатичних клітинах В може бути показником
їх функціонального стану: при підсиленні їх секреторної активності знижується
вміст цинку в цих клітинах. При недостатності інсулярного апарату концентрація цинку в В-клітинах різко
знижена.
1. Берегова Т.В., Григорова Н.В., Єщенко Ю.В.,
Бовт В.Д., Єщенко В.А. Визначення вмісту цинку та інсуліну в острівцевих
клітинах при різному функціональну стані інсулярного апарата // Фізіологічний
журнал. – 2007. – Т.53, №4. – С.100-104.
2. Григорова Н.В. Визначення цинку,
магнію та інсуліну в панкреатичних острівцях різних видів тварин // Науковий часопис НПУ імені М.П.Драгоманова. Серія №20. Біологія:
Зб.наукових праць. – К.: НПУ імені М.П. Драгоманова, 2008. – №2. – С. 45-49.
3. Григорова Н.В.,Єщенко Ю.В., Миргородська К.П.,Бовт
В.Д., Єщенко В.А. Вміст цинку та інсуліну в В-клітинах острівців щурів,
хом’яків та мишей різного віку // Materialy Miedzynarodowej konferencjї “Dynamika naykowych badan – 2007” T.7. Medycyna. Nauk biologicznych. Fizycrna
kultura I sport. – Przemysl: Nauka i Studia, 2007. – S.49-51.
4. Ещенко В.А. Гистохимическое исследование
цинка // Цитология. – 1978. – Т.20,
№8. – С.112-116.