Біологічні науки / 8.Фізіологія людини і тварин

Григорова Н.В.

Запорізький національний університет

Порівняльні дослідження вмісту цукру та кортизолу в

крові, цинку та інсуліну в панкреатичних клітинах В у

кролів при голодуванні, введенні глюкози та алоксану

Відомо, що вміст цинку в панкреатичних клітинах В у мишей і хом’ячків змінюється при голодуванні тварин та введенні їм глюкози та алоксану. Нами були проведені такі ж дослідження на кролях. Дані вмісту цукру в крові, цинку та інсуліну в панкреатичних острівцях порівнювали з рівнем кортизолу.

У дослідах було використано 55 кролів, у тому числі були контрольні (інтактні), а також ті тварини, що голодували, отримавали глюкозу та алоксан. Голодували кролі протягом 2 діб, глюкозу вводили внутрішньоовенно в дозі 10 г/кг у вигляді 40 %-вого розчину, алоксан – підшкірно в кількості 200 – 400 мг/кг 45 %-вого розчину. До забоя у тварин брали кров з вуха для визначення рівня цукру та кортизолу. Цукор крові визначали модифікованим методом Хаггедорна-Йенсена [3]. Кортизол визначали фенілгідразиновим методом [4]. Умервщляли кролів після завершення терміну голодування, через 2 год після введення глюкози та 5 діб – після ін’єкції алоксану. Шматочки підшлункової залози фіксували протягом 12 год у холодному ацетоні (4 ºС) та впродовж 24 год у рідині Буена. У першому випадку шматочки після фіксації проводили через два ксилоли, суміш ксилолу та парафіну, два рідких парафіни та заливали в парафін. У другому випадку фіксовані шматочки проводили через серію спиртів зростаючої міцності, а потім – через ксилоли, суміш ксилолу та парафіни, рідкі парафіни та заливали в парафін. Парафіновані зрізи готували 5 мкм завтовшки. Зрізи депарафінували обробкою в двох парафінах та двох спиртах (по 3 хв у кожному). Для цитохімічного визначення цинку зрізи обробляли впродовж 1 хв ацетоновим розчином 8 - (п - толуолсульфоніламіно) - хіноліну (8 - ТСХ), промивали в дистильованій воді (5 хв), замикали в гліцерин та розглядали під люмінесцентним мікроскопом (світлофільтри ФС–1 та ЖС-18). На препаратах цинк визначали по жовто-зеленій люмінесценції цитоплазми клітин острівців.

Для цитохімічного визначення інсуліну депарафіновані зрізи спочатку витримували в окислювачі (до порудіння), промивали в дистильованій воді (5 хв), забарвлювали протягом 6 хв 0,25 % спиртовим розчином альдегідфуксину, депарафінували солянокислим спиртом, промивали (5 хв) у водопровідній воді та замикали в гліцерин-желатін. На препаратах інсулін визначали по синьо-фіолетовому забарвленню зернистості В-клітин.

Інтенсивність цитохімічних реакцій 8-ТСХ та альдегідфуксину оцінювали за трибальною системою, запропонованою В.В.Соколовським [5] та Ф.Хейхоу і Д.Квагліно [6].

У інтактних (контрольних) кролів концентрація в крові складала 5,7 ± 0,24 ммоль/л, а кортизолу – 564 ± 48,2 ммоль/л дорівнював 1,9 ± 0,15 ум.од., інсуліну 4,3 ± 0,10 ум.од. При голодуванні отримані дані відповідно – 3,6 ± 0,13 ммоль/л (63 %, у порівнянні з контролем (р < 0,001)), 1542 ± 79,6 (273 % (р < 0,01)), 2,4 ± 0,13 ммоль/л (126 % (р < 0,05)), 1,7 ± 0,10 ммоль/л (131 % (р < 0,01)), введенні глюкози – 10,3 ± 0,42 ммоль/л (181 % (р < 0,001)), 255 ± 24,7 ммоль/л (45 % (р < 0,001)), введенні алоксану – 23,1 ± 0,46 ммоль/л (405 % (р < 0,001)), 134 ± 16,3 ммоль/л (24 % (р < 0,001)), 0,2 ± 0,03 ммоль/л (11 % (р < 0,001)), 0,1 ± 0,02 ммоль/л (8 % (р < 0,001)).

Таким чином, підвищення інкреторної функції наднирників при голодуванні супроводжується накопиченням цинку та інсуліну в клітинах В острівців. Зниження цієї функції при введенні глюкози та алоксану призводить до зменшення кількості двох компонентів у цих клітинах.

Отримані дані можуть бути доказами участі наднирників та ендокринної частини підшлункової залози в регуляції обміну цинку та інсуліну в панкреатичних клітинах В.

Література:

1. Берегова Т.В., Єщенко Ю.В. Зміни вмісту цинку в клітинах при різних функціональних станах інсулярного апарата підшлункової залози // Вісник ЗДУ. – 2003. - №1. – С.11-15.

2. Берегова Т.В., Григорова Н.В., Єщенко Ю.В., Бовт В.Д., Єщенко В.А. Визначення вмісту цинку та інсуліну в острівцевих клітинах при різному функціональному стані інсулярного апарату // Фізіологічний журнал. – 2007. – Т.53, №4. – С.100-104.

3. Гольдберг Е.Д., Ещенко В.А., Бовт В.Д. Сахарный диабет. Этиологические факторы. - Томск: Изд-во Томск. ун-та, 1993. - 136с.

4. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследований в клинике // М.: Медицина, 1987. – 368с.

5. Соколовский В.В. Гистохимические исследования в токсикологии. – Л.: Медицина, 1971. - 172c.

6. Хейхоу Ф., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. - М.: Медицина, 1983. - 320с.