Биологические науки/9.Биохимия и биофизика

Кусаинова Д.С., Тулешова А.Ж., к.м.н. Клюев Д.А., д.м.н., доц. Молотов – Лучанский В.Б., д.б.н. проф. Муравлева Л.Е.

Государственный медицинский университет, Караганда, Республика Казахстан

Гистоновые белки лейкоцитов крови больных гломерулопатиями и тубулопатиями и ассоциированных с артериальной гипертензией

В последние годы было высказано предположение, что в механизмах повреждения эндотелия у больных, как с хроническими болезнями почек, так и артериальной гипертензией принимают участие и клетки белой крови [1,2,3].

Целью нашего исследования явилось изучение гистоновых белков лейкоцитов крови больных гломерулопатиями и тубулопатиями и на фоне артериальной гипертензии.

Обследовано 127 больных с хроническими поражениями почек и артериальной гипертензией, относящихся к различным группам стратифицированных рисков. В том числе мужчин 53, женщин 74. У пациентов выявлены тубуло- и гломерулопатии (тубуло-интерстициальный нефрит, хронический пиелонефрит, гломерулонефриты, диабетическая нефропатия, обменные нефропатии) после физикальных и дополнительных исследований, стандартизированных в клинической медицине. В качестве контроля были исследованы клинико-биохимические показатели здоровых лиц, а для сравнения проводилось сопоставление с показателями пациентов, имеющих почечную патологию без АГ.

Больные были разделены на 5 групп. В первую группу вошли 43 больных с хроническим пиелонефритом (ХПЛ), из них 25 женщин и 18 мужчин. Во вторую группу вошли 20 больных с тубуло-интерстициальным нефритом (ИН), из них 12 женщин и 8 мужчин. В третью группу вошли 28 больных с артериальной гипертензией (АГ), не связанной с патологией почек, из них 16 женщин и 12 мужчин. В четвертую группу вошли 24 больных с артериальной гипертензией в сочетании с хроническими поражениями почек (АГ+ХБП), из них 14 женщин и 10 мужчин. В пятую группу вошли 12 больных с сочетанием АГ и сахарного диабета типа II (АГ+СД), из них 7 женщин и 5 мужчин. В качестве контроля использовалась кровь клинически здоровых 25 доноров, из них 15 женщин и 10 мужчин.

Выделение лейкоцитов. Гепаринизированную кровь (20 ед/мл) центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин. Собирали верхний слой клеток, содержащий лейкоциты. Примесь эритроцитов разрушали 0,83% раствором хлорида аммония. Лейкоциты дважды отмывали фосфатным буфером. Концентрацию клеток в суспензии доводили до 100—200 тыс/мкл. [4]. Содержание гистоновых белков определяли кислотно-спиртовым методом Маркушевой Л.И. и соавт. [5]. Результаты обрабатывали методом вариационной статистики.

В таблице 1 приведен соотношения нуклеосомных гистонов и гистона Н1 в лейкоцитах больных с хронической патологией почек и при ассоциации с артериальной гипертензией. Из данных таблицы 1 следует, что в лейкоцитах крови больных ХПЛ зафиксировано достоверное снижение содержания гистона Н1 – в 2 раза по сравнению с таковым контроля.

Таблица 1 – Гистоновые белки лейкоцитов крови больных гломерулопатиями и тубулопатиями и ассоциированных с артериальной гипертензией ( X ± m)

Группа	Н1, мг/10^6 клеток	Н2А,Н3,Н4, мг/10^6 клеток	Н2В, мг/10^6 клеток
Контроль, n=25	0,028±0,007	0,032±0,008	0,011±0,001
Группа 1 ХПЛ, n=43	0,013±0,009*	0,040±0,008	0,012±0,007
Группа 2 ИН, n=20	0,010±0,002*	0,038±0,01	0,022±0,009*
Группа 4 АГ, n=28	0,017±0,007*	0,039±0,01	0,018±0,01
Группа 5 АГ+ХБП,n=24	0,022±0,003	0,046±0,016*	0,031±0,009*
Группа 6 АГ+СД, n=12	0,006±0,001*	0,023±0,005*	0,003±0,001*
Условные обозначения: * - достоверность различий по сравнению с контролем, p < 0.05 и ниже

В лейкоцитах крови больных ИН наблюдалось достоверное снижение как гистона Н1 (в 2,8 раза) при антибатном росте содержания гистона Н2В (в 2 раза) по сравнению с таковыми контроля. В лейкоцитах крови больных АГ зафиксировано достоверное снижение гистона Н1 – на 65% по сравнению с контролем.

В тоже время в лейкоцитах крови больных АГ + ХПБ наблюдалась тенденция к снижению гистона Н1 при достоверном увеличении фракций гистонов Н2А, Н3, Н4 (на 44%) и Н2В (в 2,8 раза) по сравнению с контролем.

Наиболее выраженные нарушения спектра нуклеосомных гистонов и гистона Н1 зафиксировано в лейкоцитах крови больных АГ +СД. Это документируется резким достоверным снижением содержания гистона Н1 (в 4.7 раза), гистонов Н2А, Н3, Н4 (на 39%) и Н2В (в 3,6 раза) по сравнению с контролем.

Как следует из полученных данных, ассоциация АГ и хронической почечной патологии индуцирует выраженное нарушение спектра нуклеосомных гистонов лейкоцитов крови больных. По нашему мнению, основной причиной изменения соотношения гистоновых белков является их окислительная модификация. Известно, что в состав хроматина помимо белков входят легкоокисляемые фракции липидов [6,7].

Результатом деструктивного действия активных форм кислорода на хроматин может быть как окислительная деструкция белков, так и липидов. Причем, в свою очередь, токсичные катаболиты перекисного окисления липидов могут образовывать аддукты с белками, приводя к нарушению их нативной конформации и к утрате функциональной активности. Следствием изменения соотношения нуклеосомных гистонов и гистона Н1 является нарушение упаковки хроматина, что приводит к изменениям экспрессии генов, что, свою очередь, влияет на метаболизм лейкоцитов и их функциональный статус.

ЛИТЕРАТУРА

1.Топчий И.С. // Внутренняя медицина – 2008.- 5-6(11-12).- С. 12-18

2.Топчий И.И. // Мистецтво лікування. — 2008. — № 2. — С. 65-70;

3.Топчий И.И., Горбач Т.В., Бондарь Т.Н. // Серце і судини. — 2006. — № 1. — С. 89-94;

4. Федорова М.3., Левин В.Н. // Клиническая медицина.–2000.–№8.– С. 35-38

5. Маркушева Л.И., Савина М.И., Решина В.М. и др. // Клиническая лабораторная диагностика.– 2000.– № 7.– С. 18-20.

6.Левицкий Е.Л., Губский Ю.И. // Укр. биохим. журн. —1994. —Т. 66, №4. —С. 18—30

7.Губський Ю.І., Левицький Є.Л. // Журн. АМН України. —1997. —Т. 3, №2. —С. 275—281