УДК 591.446:615.37

Д. мед. н., проф. Кащенко С. А., ас. Петизина О. Н., ас. Морозова Е. Н., асп. Морозов В. Н.

ГЗ «Луганский государственный медицинский университет», Украина

ВЗАИМОСВЯЗЬ ПАРАМЕТРОВ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ИНТАКТНЫХ КРЫС ПО ДАННЫМ КОРРЕЛЯЦИОННОГО АНАЛИЗА

Изучена корреляционная взаимосвязь между морфологическими параметрами подмышечных лимфатических узлов интактных крыс. Результаты исследования показали, что у животных разных возрастных групп наблюдалась положительная взаимозависимость.

Ключевые слова: лимфатические узлы, крысы, корреляция.

Иммунная система является одной из важнейших гомеостатических систем организма и во многом определяет степень здоровья человека и его адаптационные возможности [2, 7, 9, 11]. Лимфатические узлы относятся к периферическим иммунным органам, которые расположены на пути движения лимфы по лимфатическим сосудам от органов и тканей, имеют сложную структурную организацию и выполняют различные функции, а именно: барьерную, защитную, фильтрующую, резервуарную, обменную, транспортную, лимфоцитопоэтическую [1, 12]. В них содержатся зрелые антигенчувствительные иммунокомпетентные клетки, циркулирующие в организме и взаимодействующие с различными тканями и кровеносным руслом посредством системы лимфатических сосудов. Механизм функционирования лимфатических узлов зависит от структурной организации их компонентов и антигенного влияния [1, 8, 10]. В данном исследовании корреляционный анализ использовался для выявления взаимосвязи между результативными признаками статистической совокупности, а также для определения зависимости параллельных изменений нескольких признаков различных по происхождению, модальности и единицам измерения этой совокупности в эксперименте. Методы корреляции позволяют определить особенности существующих связей между морфологическими параметрами в органе, выявить выраженность и направление, а также оценить достоверность полученных результатов [3]. Таким образом, корреляционный анализ позволяет объединить и объективно оценить данные, полученные в результате комплексного морфометрического исследования подмышечных лимфатических узлов интактных крыс.

Работа является частью научно-исследовательской темы кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ГЗ «Луганский государственный медицинский университет» «Особливості будови органів імунної та ендокринної систем при імуностимуляції та імуносупресії», государственный регистрационный номер 0112U000096.

Материалы и методы. Экспериментальное исследование проведено в гистологической лаборатории ГЗ «Луганский государственный медицинский университет» на 12 белых беспородных крысах-самцах, полученных из вивария лабораторных животных. В эксперименте использовались неполовозрелые животные с массой 60 – 90 г и половозрелые крысы – 210 – 250 г. Крысы содержались в стандартных условиях вивария со свободным доступом к воде и пище, по 6 особей в металлических клетках. Для исключения влияния суточных колебаний на изучаемые показатели лимфатических узлов основные манипуляции проводились в утренние часы [6]. При проведении эксперимента руководствовались научно – методическим пособием «Основи імунології та імуноморфології» (М. А. Волошин та ін., 2010) [2]. Исследование выполнялось в соответствии с принципами Хельсинской декларации, принятой Генеральной ассамблеей Всемирной медицинской ассоциации (2000), Конвенции Совета Европы о правах человека и биомедицины (1997), Международного совета медицинских научных обществ, Международного кодекса медицинской этики (1983), утвержденного I Национальным конгрессом по биоэтике (Киев, 2001). При работе с животными руководствовались Законом Украины «Про захист тварин від жорсткого поводження» от 21.02.2006 р. № 3447, положениями Европейского научного сообщества «Использование животных в исследованиях» (2000) [4]. Животных выводили из эксперимента при помощи ингаляционного наркоза хлороформом с последующей декапитацией. Затем выделяли из подмышечной области лимфатические узлы и отделяли их от подкожно-жировой клетчатки. После чего на торсионных весах WT – 1000 определяли абсолютную массу органа, с помощью штангенциркуля измеряли длину, ширину и толщину, затем лимфатические узлы фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. После фиксации исследуемый материал подвергался стандартной гистологической проводке с последующей заливкой в парафиновые блоки. Из полученных таким образом блоков изготавливали серийные срезы толщиной 5 – 6 мкм. Препараты окрашивали гематоксилин-эозином [2]. Морфометрическое исследование лимфатических узлов производилось на компьютерном комплексе, в состав которого входят: микроскоп Olympus CX – 41, цифровой фотоаппарат Olympus SP 500UZ.

На гистологических препаратах лимфатического узла при помощи компьютерной программы для морфометрических исследований «Morpholog» В. В. Овчаренко, В. В. Маврич [5] производили измерения больших и меньших диаметров лимфатических узелков и их герминативных центров, ширины коркового вещества, определяли количество ядер клеток на единицу площади (1000 мкм²): в корковом (корона, герминативный центр, межузелковое плато) и мозговых тяжах, а также паракортикальной зоне. Подсчет проводили в шести полях зрения каждого среза, анализировались шесть срезов с каждого объекта.

Полученные данные заносили в программу Microsoft Office Excel для сохранения. Статистическую обработку данных исследования производили при помощи пакета прикладных статистических программ «Statistica 5.5».

Результаты исследования. В результате морфометрических измерений неполовозрелых и половозрелых интактных белых беспородных крыс-самцов были получены макро- и микрометрические показатели подмышечных лимфатических узлов в целом и их отдельных зон, а также подсчитано количество ядер клеток на единице площади (1000 мкм²) препарата в области герминативного центра и короны лимфатических узелков, межузелкового плато, паракортикальной зоны и мозговых тяжей.

У неполовозрелых интактных животных выявили наличие сильной прямой корреляционной связи между: массой лимфатического узла и его длиной (0,96), массой органа и большим диаметром лимфатического узелка (0,98), а так же между массой и большим диаметром герминативного центра (0,86); длиной лимфатического узла и его шириной (0,90), а так же между длиной органа и шириной коркового вещества (0,94). Тесная взаимозависимость определялась между количеством ядер клеток в герминативном центре и большим (0,90) и меньшим (0,79) его диаметрами, а также количеством ядер клеток в межузелковом плато и шириной коркового вещества (0,94).

Сильная корреляционная взаимозависимость имела место у половозрелых контрольных крыс между массой лимфатического узла и его длиной (0,89), массой органа и большим диаметром лимфатического узелка (0,89), массой и большим диаметром герминативного центра (0,86), а также длиной лимфатического узла и его шириной (0,99), длиной органа и шириной коркового вещества (0,97). Высокая степень положительной взаимосвязи выявлялась между: количеством ядер клеток в герминативном центре и большим (0,87) и меньшим (0,87) его диаметрами, между количеством ядер клеток в межузелковом плато и шириной коркового вещества (0,85).

Вывовды:

В результате проведенного анализа взаимозависимости между данными интактных крыс разных возрастных периодов выявили, что корреляционная связь оказалась положительной.

Литература:

1. Антипов Н. В. Морфологические особенности лимфатических узлов / Н. В. Антипов // Український морфологічний альманах. – 2012. – Т. 10, № 2. – С. 3–5.

2. Волошин М. А. Основи імунології та імуноморфології / Волошин М. А., Чайковський Ю. Б., Кущ О. Г. – Запоріжжя-Київ, 2010. – 170 с.

3. Владимир Боровиков STATISTICA. Искусство анализа данных на компьютере: Для профессионалов 2-е изд. (+СD) / Владимир Боровиков. – Санкт-Петербург: «Питер Принт», 2003. – 688 с.

4. Закон України «Про захист тварин від жорстокого поводження» від 21.02.2006 р., № 3447.

5. Овчаренко В. В., Маврич В. В. Комп’ютерна програма для морфометричних досліджень “Morpholog” / Свідотство про реєстрацію авторського права на твір № 9604, дата реєстрації 19.03.2004.

6. Ритм чередования света и темноты как экологический фактор, влияющий на состояние иммунной системы / В. А. Труфакин, А. В. Шурлыгина, С. В. Мичурина [и др.] // Аллергология и иммунология. – 2008. – Т. 9, № 4. – С. 431–437.

7. Романюха А. А. Иммунная система: норма и адаптація / А. А. Романюха // Иммунология. – 2009. – Т. 30, № 1. – С. 7–12.

8. Суточная динамика клеточного состава тимуса и лимфатических узлов мышей в норме, при постоянном освещении и при введении мелатонина / Г. И. Литвиненко, А. В. Шурлыгина, Л. В. Вербицкая [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2005. – Т. 140, № 8. – С. 181–185.

9. Труфакин В. А. Проблемы гистофизиологии иммунной системы / В. А.Труфакин, А. В. Шурлыгина // Иммунология. – 2002. – № 1. – С. 4–8.

10. Хаитов Р. М. Современные представления о защите организма от инфекции / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. – 2000. – № 1. – С. 61–64.

11. Lymphatic system: morphofunctional considerations / G. Sallustio, C. Giangreogorij, L. Cannas [et al.] // Rays. – 2000. – Vol. 25, № 4. – P 413–427.

12. Mebius R. E. Organogenesis of lymphoid tissues / R. E. Mebius // Nat. Rev. Immunology. – 2003. – Vol. 3. – P. 292–303.