Зыкова Е.В., Островский О.В.

Волгоградский государственный медицинский университет, Россия

Использование метода капиллярного электрофореза для количественного анализа аскорбиновой кислоты в витаминных сборах

Недостаток аскорбиновой кислоты (АК), связанный с сезонным авитаминозом или острым или хроническим  заболеванием, как правило, ослабляет иммунную систему, снижает сопротивляемость организма, удлиняет период реабилитации после перенесенной болезни. Витаминные сборы, применяемые в виде чая и настоев, не имеют побочных действий и могут употребляться сколь угодно долго – пока есть необходимость в восполнении необходимых организму веществ. Витаминные сборы состоят из растений, содержащих АК, рутин, флавоноиды, каротиноиды и другие веществ. Так, сбор витаминный №2 содержит смесь равных частей плодов шиповника и рябины. Фармакологическая активность этого сбора определяется содержанием АК, по этому показателю проводится и его стандартизация.

Традиционным методом анализа АК в растительном сырье является титриметрический метод с 2,6 – ДХФИФ [1]. Однако применение этого метода на практике сопряжено с преодолением большой проблемы, которая связана с тем, что многие методики, удовлетворяющие a priori основным требованиям, предъявляемым к аналитическому контролю, разработаны с использованием индивидуальных веществ и не учитывают влияния компонентов матрицы. Поэтому недорогой и простой титриметрический метод, не всегда удается использовать для точного определения АК в многокомпонентных растительных образцах. Решить существующую проблему анализа АК можно только с помощью высокоспецифичных или сепарационных методов. Поэтому, поиск и разработка методик анализа АК в многокомпонентных растительных препаратах с использованием капиллярного электрофореза, который в отличие от титриметрии, позволяет определять АК в присутствии других компонентов, представляется весьма актуальной [2].

Целью настоящего исследования являлась оценка возможности применения методики КЭ для количественного анализа АК в витаминном сборе №2.

Работу проводили с использованием системы капиллярного электрофореза фирмы Agilent Technologies (G1602A) с кварцевым капилляром диаметром 50мкм и общей длиной 40 см. Мобильная фаза представляла собой смесь 25 мМ раствора тетрабората натрия и 50 мМ раствора SDS (додецилсульфат натрия). Анализ проводили при температуре 25ºС и напряжении +20 кВ. Вещества детектировали спектрофотометрически при длине волны 254 нм. Объектом исследования являлся витаминный сбор №2 (ЗАО фирма «Здоровье», Россия). Подготовку проб проводили согласно рекомендациям ГФ.

Предварительно по субстанции АК была проведена валидационная оценка используемой методики (табл.1), так же нами были сняты спектры пика субстанции АК для последующей правильной его идентификации в составе витаминного сбора (Рис.2).

Таблица 1.

Валидационные характеристики методики капиллярного электрофореза для количественного определения АК

Характеристики	Методика определения АК
Диапазон линейности, мМ	0,05-1
Коэффициент корреляции, r	0,999
Прецизионность, RSD (%)	1,8
Точность, R (%)	98,3-101,9

Пример электрофореграммы пробы витаминного сбора представлен на рисунке 1.

Рисунок 1. Электрофореграмма пробы витаминного сбора №2.

При указанных параметрах анализа и ввода пробы в течении 10 секунд под давлением 30 мбар нам удалось получить четкий пик АК, что мы подтвердили сравнив спектр этого пика со спектром стандартного раствора АК.

Рисунок 2. Спектры пиков АК в составе витаминного сбора №2 и стандартного раствора АК.

Для количественной оценки АК использовали внутренний стандарт ПАБК. Результаты содержания АК в витаминном сборе №2 представлены в таблице 2.

Таблица 2.

№ пробы	Содержание АК мг/100 г сырья	№ пробы	Содержание АК мг/100 г сырья
1	3,54	6	3,50
2	3,47	7	3,53
3	3,49	8	3,49
4	3,44	9	3,64
5	3,60	10	3,58
Среднее значение	3,53
СV, %	1,78

Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что предлагаемый нами подход позволяет идентифицировать и точно определить содержание АК в сложных многокомпонентных лекарственных сборах. Методика КЭ для количественного определения АК может быть использована для контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов, содержащих АК.

Литература

1. Государственная фармакопея СССР XI. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное сырье. МЗ СCСР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина. - 1990. – 400 с.

2. Каменцев Я.С., Комарова Н.В. Капиллярный электрофорез: аппаратурное оформление и области применения // Партнеры и конкуренты. – 2002. - №1. – С.12-15.