Медицина, 7

Кохан Т.Г, Пятихатка Н.В.

Специализированная медико-санитарная часть № 6 г. Днепропетровск

Сравнительная характеристика определения групп крови и резус-фактора различными методами

Задачей нашей работы являлось сравнительное изучение определения групп крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток (в двух сериях), изготовляемых на базе станции переливания крови СМСЧ-6, а также при помощи стандартных эритроцитов (перекрестным методом) и тест реагентами анти-А и анти-В. В отличие от стандартных сывороток, последние характеризуются более высокой чувствительностью и стабильностью, что позволило выявлять не только А₁ и А₂ в эритроцитах группы А (II) и АВ (IV) но и более редко встречающиеся разновидности антигена А (ІІ), что не всегда удавалось при использовании стандартных изогемагглютинирующих сывороток [1]. Принимая во внимание высокую специфичность и активность моноклональных антител, мы использовали один титр тест-реагентов анти-А и анти-В [2]. Тест реагент «анти-D^R супер» использовали в комплексе с изоиммунными анти-Rh₀(D) сыворотками.

Природа иммунологических осложнений была установлена в 1901 году с открытием первых антигенов групповой системы АВО. В настоящее время известно около 300 групповых антигенов крови, объединяемых в 25 групповых систем: MN, Келл, Даффи, Кидд, Лютеран, Сид, Картрайд, Йорк и др. В клинической практике кровь тестируется только по трем групповым антигенам (А, В, Rh₀) двух групповых систем (АВО и резус). Под группами крови АВО подразумевают различные сочетания антигенных свойств эритроцитов (агглютиногенов) и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови [3].

Резус-фактор представляет собой агглютиноген, впервые обнаруженный в эритроцитах обезьяны Macacus rhesus.

Все исследования проводили по методике, утверждённой инструкцией [4].

Как показали 12-ти летние наблюдения во время работы не всегда моноклональные тест-реагенты (указанной фирмы [2]) и стандартные сыворотки показывают один и тот же результат в случае трудноопределяемых групп крови и резус фактора. Проблемную кровь с исследуемой пробирки приходится использовать многократно, дублируя все способы определения или группы крови, или резус-фактора, чтобы выдать правильный результат (подгруппные А₂ и А₂В). Единично, но бывают такие случаи, что одному врачу-лаборанту нельзя точно определить резус-фактор и выдаваемый результат отражает лишь вероятностную характеристику, что включает и жизненные показатели пациента (табл. 1).

Один из ведущих отечественных иммунологов прошлого столетия, автор метода определения резус-фактора в сывороточной среде на чашках Петри проф. Н.И.Блинов в своем фундаментальном труде «Учение о группах крови» (1940г.) указывал: «Ошибки, зависящие от биологических свойств крови можно разбить на две группы. С одной стороны, наблюдаются случаи, когда реакция агглютинации не наступает там, где она должна быть, с другой стороны, она появляется там, где ее не должно быть». Резюмируя сказанное, можно сделать вывод об актуальности и сейчас того, что определение группы крови и резус-фактора у человека является очень кропотливой работой, требующей большого внимания и напряжения в течение всего рабочего дня.

Таблица 1

Сравнительное определение резус-фактора различными методами

Варианты определения	Группа крови	Используемый тест-реагент			Истинный результат
		Стандартные сыворотки анти- Rh(D) O(I), A(II), B(II), AB(IV)		Тест-реагент «анти-D^Rсупер»
		Титр-серия	Результат
I	А(II)	№1 (А) + №2 (А) + №1 (АВ) ─ №2 (АВ) +		─	Rh- отр
II	A(II)	№1 (А) + №2 (А) + №1 (АВ) + №2 (АВ) +		─	Rh+ пол
III	A(II)	№1 (А) ─ №2 (А) + №1 (АВ) + №2 (АВ) ─		─	Rh- отр
IV	O(I)	№1 (0) + №2 (0) + №1(АВ) ─ №2 (АВ) ─		+	Rh+ пол
V	A(II)	№1 (А) + №2 (А) + №1 (АВ) ─ №2 (АВ) ─		─	Rh- отр

Пояснение: титр-серия — маркировка на стандартных сыворотках, для каждой группы имеется по 2 варианта сывороток, отличающихся донором и титром (в установленных пределах), хотя последний и не указывается.+/─ - наличие или отсутствие агглютинации.

Таблица 2

Сравнительное определение группы крови различными методами

Варианты исследуемой крови	Реакция эритроцитов с гемагглютинирующими сыворотками групп			Реакция исследуемой плазмы со стандартными эритроцитами групп		Реакция эритроцитов, исследуемых с тест-реагентами		Установленная группа крови
	O(I)	A(II)	B(III)	A(II)	B(III)	aнти-А	aнти-В
Кровь подрупной группы	+	─	─	─	+	+	─	A(II)
Кровь подрупной группы	+	+	─	─	─	+	+	AB(IV)
Кровь с низким Hb	+	─	+	─	+	─	─	A(II)

Пояснение:+/─ - наличие или отсутствие агглютинации.

Двенадцатилетний опыт работы показывает, что моноклональные антитела (цоликлоны) очень хороши для определения группы крови и резус-фактора, когда у пациентов нормальный гемоглобин и он здоров, а вот для оперирующихся больных в урологии, гнойной хирургии, терапевтическом отделении, кардиологии, гинекологии с помощью цоликлонов можно дать неправильный ответ (табл. 2) в следующих случаях:

а) если Hb от 30 до 47 г/л – лучше определять группу крови и резус-фактор гемагглютинирующими сыворотками и перекрестным методом. Цоликлоны не срабатывают, не наступает агглютинация , т.к. очень мало эритроцитов;

б) больные раковой патологией и находящиеся в реанимационном отделении. Когда срочно надо делать переливание, а пациенты уже получили очень интенсивное медикаментозное лечение;

в) у новорожденных (из вен пуповины);

г) у беременных женщин с хроническими заболеваниями.

Это объясняется не только сниженным от нормы уровнем гемоглобина, но и наличием в крови различных лекарственных препаратов. Последнее в литературе практически неосвещено и требует дополнительных исследований.

Учитывая специфику основной работы, дополнительно проведен анализ процентного соотношения групп крови (табл.3, рис. 1). На протяжения последних пяти лет в серологической лаборатории было обследовано 27035 человек, проанализировав результаты их группы крови и резус-фактора, можно сказать, что 32% составляют пациенты первой группы, 37% - пациенты второй группы, 22%- третьей и 9%- четвертой. Самой распространенной в Кировском и Красногвардейском районах является группа A (II) Rh+.

Таблица 3

Распределение пациентов по группам крови и резус фактору (в Кировском и Красногвардейском районе г. Днепропетровска)

Группа крови	O(I)	A(II)	B(III)	AB(IV)
Рез.факт
Rh+ пол	1447 (чел)	1624 (чел)	974 (чел)	411 (чел)
Rh- отр	289 (чел)	376 (чел)	207 (чел)	79 (чел)

Рисунок 1

Распределение пациентов по группам крови и резус фактору (в Кировском и Красногвардейском районе г. Днепропетровска).

Подводя итог, можно утверждать, что определение группы крови и, тем более, резус-фактора является неоднозначным процессом и требует использования нескольких методик и различных тест-реагентов для установления истинного результата. Причины необходимости, но недостаточности применения того или иного тест-реагента различны. В случае использование антител возможна их недостатосная специфичность и способность к перекрёстным реакциям. Отдельной и наиболее значимой причиной неясного результата является так называемая проблемная кровь, имеющая, как правило, низкий гемоглобин; однако есть и другие факторы: использование фармакологических препаратов (в том числе наркотиков) и некоторые заболевания пациента. В отношении определения резус-фактора можно говорить о благоприятном статистическом распределении пациентов (рис. 1) в данном районе, что дополнительно позволяет избежать ошибки (низкий процент людей с отрицательным резус-фактором).

Всё это требует дополнительных исследований, но уже сейчас необходимо вводить электронные чипы с биометрическими данными каждого пациента, что позволило бы сделать каждый проблемный анализ уникальным и дало бы возможность не только установить причины ошибочных или неясных результатов, но и разработать соответствующие методики для такой крови с учётом текущего состояния пациента. А такие данные паиента как ВИЧ статус, наличие инфекций, передающихся через кровь, употребление психотропных препаратов позволит повысить безопасность труда персонала лаборатории.

Литература

1. Изоиммунология и вопросы клиники и лечение гемотрансфузионных осложнений. Сборник инструкций и указаний под ред. Умновой М.А и др. -М.: Медицина. 1979. -264 с.

2. Регистрация иммунологического препарата № 581/06-3002 00 000, г. Харьков.

3. Минеева Н.В. Группы крови человека. Основы иммунологии. С.-П. - 2007.

4. Визначення груп крові за системами АВ0, резус та імунних антитіл. Iнструкція, затверджена наказом Мiнiстерства охорони здоров′я вiд 05.07.1999 №164.