УДК 579.61:616-053.2

Дніпропетровський національний університет

М.А. Хархота, Л.П. Голодок.

Цербіден- новий рослинний антибіотик, щирокого спектру дії.

Одним з шляхів отримання нових антибіотиків є вивчення інших об'єктів для виявлення нових продуцентів. В цьому відношенні перспективні і вищі рослини.

Одержаний з лікарської рослини сімейства Аstеrасеае комплексний антибіотичний препарат цербіден - поліфункціональний, широкого спектру біологічної дії. Спектр антимікробної дії цербідена своєрідний: препарат активний відносно грампозитивних, деяких грамнегативних видів бактерій і грібов-дерматофітов [1].

Метою даної роботи було вивчення властивостей антибіотика цербідену, виділенного з вищих рослин та його ефективність по відношенню до грибів роду Candida, стійких до офіцинальних антимікотичних препаратів.

Задачі роботи, що вирішувалися: спектр дії препарату, вплив сиворотки крові на активність препарату.

Для визначення антимікробної активності цербідена в рідких поживних середовищах використовувався метод десятикратних розведень в модифікації С.І. Зелепухи, що в порівнянні із звичайним методом десятикратних розведень, дає змогу більш точно визначити мінімальні діючі концентрації [2]. В якості тест-культур використовувалися слідуючі мікроорганізми: Staphylococcus aureus ATCC 6538P, Escherichia coli ATCC 25922, Candida albicans ATCC. Вибір цих культур пояснюється тим, що ці мікроорганізми є найбільш типовими представниками грам позитивних бактерій, грам негативних бактерій та дрожеподібних грибів відповідно. Як відомо з літератури, сироватки крові зв'язує преперат, тому ми вирішили також дослідити активність цербідену в середовищах з 5%, 20% сироватки.

В якості рідкого поживного середовища для культивування бактерій використовувався м'ясо-пептонний бульйон (МПБ), для вирощування грибів- середовище Сабуро.

Цербіден- препарат практично не розчинний у воді, тому для його розчинення використовували етиловий спирт. Етиловий спирт, діючи токсично на досліджувані мікроорганізми, може маскувати дію цербідена. Для врахування його дії потрібно мати відповідний контроль. Згідно з даними літератури, для досліджуваних нами тест-культур, кількість спирту в середовищі не повинна перевищувати 4%.

Було досліджено вплив сироватки крові на активність препарату та його ефективність по відношенню до грибів роду Candida, стійких до офіцинальних антимікотичних препаратів.

За мінімальну подавляючи концентрацію вважали ту мінімальну концентрацію, яка подавляла видимий ріст мікроорганізмів. Врахування результатів проводили через 21 годину та 48 годин. Культивували в термостаті при 37° С.

Результати, отримані під час дослідження активності цербідену, занесені до таблиці 1.1

Мікроорганізм	При відсутності сироватки крові		При наявності 5% сироватки крові		При наявності 20% сироватки крові
	МПК, мкг/мл	МЦК, мкг/мл	МПК, мкг/мл	МЦК, мкг/мл	МПК, мкг/мл	МЦК, мкг/мл
Staphylococcus aureus ATCC 6538P	20	20	50	100	100	200
Escherichia coli ATCC 25922	≥200	≥200	≥200	≥200	≥200	≥200
Candida albicans ATCC 885/653	20	50	100	200	100	200

Отримані дані свідчать про те , що препарат має досить широкий спектр дії: активний по відношенню до Staphylococcus aureus ATCC 6538P та Candida albicans ATCC 885/653. По відношенню до Escherichia coli ATCC 25922 антибіотик не активний. Мінімальна подавляючи концентрація Staphylococcus aureus та Candida albicans становить 20 мкг/мл. Герміцидну концентрацію визначали шляхом висіву на агаризоване середовище з тих пробірок, де не відмічався видимий ріст. Чашки Петрі культивували при температурі 37 С 21 годину. Ми визначили, що герміцидна концентрація до Staphylococcus aureus співпадає з гермістатичною, а герміцидна концентрація до Candida albicans становить 50 мкг/мл.

Дані таблиці 1.1 свідчать, що сиворотка крові значно зменшує активність антибіотика. Так гермістатична концентрація до Staphylococcus aureus ATCC 6538P збільшилась з 20 мкг/мл до 50 мкг/мл, а герміцидна взагалі зросла в 5 разів, з 20 мкг/мл до 100 мкг/мл. Гермістатична та герміцидна концентрації до Candida albicans ATCC 885/653 збільшилися відповідно до 100 мкг/мл та 200 мкг/мл.

Як видно з отриманих даних, при наявності 20% сиворотки активність цербідена стосовно Staphylococcus aureus ATCC 6538P ще зменшуеться ( гермістатична концентрація зростає до 100 мкг/мл, а герміцидна- до 200 мкг/мл.) При збільшенні кількості сиворотки до 20% активнісиь препарату щодо Candida albicans ATCC 885/653 не змінилася у порівнянні з активністю у середовищі з 5% сиворотки.

Рис. 1.1. Залежність діючої концентрації цербідену від вмісту сиворотки крові в середовищі.

Як видно з рис. 1.1., збільшення МЦК цербідену до Staphylococcus aureus ATCC 6538P прямопропорціонально до зростання вмісту сиворотки у середовищі культивування. Залежність МЦК до Candida albicans ATCC 885/653 від вмісту сиворотки не підпадає під описання закону пропорційності: спочатку із зростанням вмісту сиворотки МЦК теж збільшується, але при досягненні вмісту сиворотки 20% МЦК перестає збільшуватись.

Для визначення чутливості грибів роду Candida диско-дифузійним методом використовувалися диски з слідуючими антибіотиками: амфотеріцин В ( концентрація антибіотика 40 мкг/мл ), ністатин (80 мкг/мл), клотримазол (10 мкг/мл), ітраконазол (10 мкг/мл), флуконазол ( 40 мкг/мл). В якості тест-мікроорганізмів використовували Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei. Засіяні чашки інкубували у термостаті при 37 С. Для визначення чутливості даних мікроорганізмів до препратів вимірювали зону подавлення росту. Отримані дані занесли до таблиці 1.2.

Таблиця 1.2. Чутливість грибів роду Candida до офіцинальних антимікотичних препаратів.

Препарат	Концетрація препарата, мкг/диск	Candida albicans	Candida tropicalis	Candida krusei
Амфотеріцин В	40	+	±	+
Ністатин	80	±	±	±
Клотримазол	10	+	-	-
Ітраконазол	10	+	±	±
Флуконазол	40	±	-	-
Цербіден	50	+	+	+

+ - мікроорганізм чутливий до даного прапарату,±- мікроорганізм помірно чутливий до даного прапарату,- - мікроорганізм стійкий до даного прапарату.

Як видно з даних таблиці 1.2., Candida tropicalis найбільш стійка до випробовуваних препаратів, а Candida albicans найбільш чутлива до цих самих препаратів, Candida krusei займає проміжне положення між двома вищепереліченими мікроорганізмами.

Отримані дані свідчать, що цербіден одинаково ефективний, як по відношенні до мікроорганізмів, які стійкі до випробуваних офіцинальних антимікотичних препаратів, так і тих, які чутливі до них.

За даними літепатури стійкість до цербідену у збудників хвороб розвивається повільно, її розвиток відноситься до багатоступеневого типу. У стійких до цербідена варіантів стафілококів та кандід підвищувалася чутливість до вживаних в клініці антибіотиків мікробного синтезу, знижувалася патогенність (вони майже повністю втрачали дермонекротичні і гемолітичні властивості, володіли зниженою вірулентністю)

ВИСНОВКИ

1. Встановлена висока антимікробна активність щодо грампозитивних бактерій та патогенних грибів і слабка дія на грамнегативні мікроорганізми .

2. Встановлено, що у присутності в середовищі сироватки крові антимікробна активність препарату знижується, причому різною мірою відносно різних видів мікроорганізмів.

3. Встановлено, що цербіден одинаково ефективний, як по відношенні до мікроорганізмів, які стійкі до випробуваних офіцинальних антимікотичних препаратів, так і тих, які чутливі до них.

Перелік посилань:

1. Бондаренко А.С. Петренко Г.Т., Айзенман Б.Е. Эффективность антибиотического препарата К.// Микробиологический журнал.-1978.- 40, №3. – с. 361-366.

2. Зелепуха С.И., Починок П.Я., Неграш А.К. О методике изучения антимикробных свойств высших растений //Фитонциды в народном хозяйстве.- К.; 1964.- С.88-92.