Использование метода ВЭЖХ для обнаружения и количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме антисеборейного действия

Т.С. Киселева, Г.В. Васильев, О.О. Новиков

Белгородский государственный университет, г. Белгород, ул. Победы, 85

 

Резвератрол (3,5,4'-тригидроксистильбен) – природное биологически активное вещество полифенольной природы из класса стильбенов [5]. Значительный интерес к данному соединению возник благодаря его разносторонней фармакологической активности: антиоксидантная и противовоспалительная [8], противогрибковая, антимикробная и противовирусная [6], и др. Существуют работы, посвященные изучению антигистаминных свойств резвератрола [2,4]. На данный момент отсутствуют данные о токсичности данного соединения [3].

Целью настоящего исследования явилась разработка методик идентификации и количественного определения резвератрола в модельной смеси (бальзам с резвератролом) методом высоко-эффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Обнаружение и количественное определение резвератрола в модельной смеси методом ВЭЖХ

Определение проводили на хроматографической колонке Диасфер-110-С18 150х4 мм, 5 мкм. Для детектирования образца был использован детектор LC/9563. Длина волны детектирования составляла 306 нм. В качестве подвижной фазы использовали смесь спирт этиловый–вода очищенная–кислота уксусная (…), скорость подачи элюента - 1 мл/мин. Объем вводимой пробы - 20 мкл. Продолжительность анализа – 8 мин.

Хроматограммы регистрировали и обрабатывали на приборе «Мультихром 1.5» (версия 2.1 для Windows Ampersand Ltd). Пик идентифицировали по стандарту резвератрола (рисунок 2). Количественное определение проводили по площади пика резвератрола в стандартном растворе и анализируемой модельной смеси.

Рисунок 2 - Хроматограмма стандартного образца резвератрола

 

Из хроматограммы резвератрола в модельной смеси (рисунок 3) видно, что время удерживания составляет tудерж. ~ 4,2 мин, что соответствует времени удерживания стандартного образца резвератрола.

Рисунок 3 – Хроматограмма резвератрола в разработанном бальзаме

Было проведено 7 серий измерений количественного содержания резвератрола в разработанной нами модельной смеси.

Результаты исследования представлены в таблице 1.

 

 

Таблица 1- Результаты количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме антисеборейного действия

№

образца

Метрологические
характеристики

1

3,0

-0,01

0,0001

2,99%

0,009

0,015

0,0354

e = 1,18%

2

2,9

0,09

0,0081

3

3,0

-0,01

0,0001

4

3,0

-0,01

0,0001

5

3,0

-0,01

0,0001

6

3,0

-0,01

0,0001

7

3,0

-0,01

0,0001

 

2,99

 

0,009

 

Анализ данных, приведённых в таблице 1, показал, что стандартное отклонение при использовании метода ВЭЖХ в модельной смеси составило 1,18±0,0354%. Содержание резвератрола в разработанном бальзаме составило около 98,8%, что соответствует требованиям НД.

С использованием метода ВЭЖХ было проведено изучение сроков годности разработанного состава по критерию «Количество резвератрола». Количественное содержание резвератрола в бальзаме через 3 месяца хранения в стандартных условиях представлено в таблице 2.

Таблица 2 - Результаты количественного определения резвератрола в модельной смеси после 3 месяцев хранения

№

образца

Метрологические
характеристики

1

3,0

-0,03

0,0003

2,97%

0,018

0,02

0,0472

e = 1,59%

2

2,9

0,07

0,0049

3

3,0

-0,03

0,0003

4

3,0

-0,03

0,0003

5

3,0

-0,03

0,0003

6

3,0

-0,03

0,0003

7

2,9

0,07

0,0049

 

2,97

 

0,018

 

Исходя из данных таблицы 2, видно, стандартное отклонение при использовании данного метода в модельной смеси составило 1,59±0,0472%, что не превышает установленного в ГФ XI издания предела ±5,0% Содержание резвератрола в бальзаме составило 98,4%, что позволяет рекомендовать данный метод для целей количественного определения резвератрола в исследуемой лекарственной форме.

Таким образом, в результате проведенного исследования были разработаны методики определения резвератрола в жидкой лекарственной форме методом ВЭЖХ, пригодные для целей фармацевтического анализа.

Библиографический список

1.     Cheong H, Ryu SY, Kim KM Anti-allergic action of resveratrol and related hydroxystilbenes. Planta Med. 1999 Apr;65(3):266-8.

2.     Crowell JA, Korytko PJ, Morrissey RL, Booth TD, Levine BS. Resveratrol-associated renal toxicity. Toxicol Sci. 2004;82(2):614-619.

3.     Figura N. et al. Antimicrobial Activity of Plant Extracts against Helicobacter pylori/ Helicobacter, Volume 11, Issue 4, Page 321-324, Aug 2006.

4.     J. B. J. ÄNEZ et al. Resveratrol Treatment Controls Microbial Flora, Prolongs Shelf Life, and Preserves Nutritional Quality of Fruit. /J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 1526−1530.

5.     Zgoda-Pols, J. R. Porter. Antimicrobial Resveratrol Tetramers from the Stem Bark of Vatica oblongifolia ssp. оblongifolia / J. R. Zgoda-Pols [et al.] // J. Nat. Prod. 2002, 65, 1554-1559.

6.     FERREIRA, R. B. [et al.].The role of plant defence proteins in fungal pathogenesis// Molecular Plant Pathology ,2007,8 (5), 677–700.

7.     Resveratrol as an antioxidant and pro-oxidant agent: mechanisms and clinical implications /С.А. de la Lastra, I. Villegas// Biochem. Soc. Trans. — 2007. — Oct.; Vol. 35 (Pt 5). — Р. 1156-1160.