Исаева Г.Ш., Поздеев О.К., Муравьев В.Ю.*

Казанский государственный медицинский университет(Россия)

*Клинический онкологический диспансер Республики Татарстан(Россия)

Определение популяционной генетической структуры штаммов Helicobacter pylori,

циркулирующих в Республике Татарстан

Штаммы H. pylori отличает большое разнообразие. Определение связи между генотипами H. pylori и клиническими проявлениями у лиц, инфицированных определенными штаммами, представляет большой научный и практический интерес. В ходе исследования мы попытались выяснить возможность существования различий в распределении генотипов H.pylori в основных этнических группах населения республики.

Целью исследования стало изучение распределения геноваров H.pylori, циркулирующих в Республике Татарстан.

Материалы и методы исследования. Нами было обследовано 71 больной. В ходе исследования были отобраны больные с тремя нозологическими формами заболеваний желудка: хронический гастрит (ХГ) и гастродуоденит (ХГД) - 22 больных (из них 13 татар, 9 русских), язвенная болезнь желудка (ЯБЖ) - 16 больных (9 русских, 7 татар), рак желудка (РЖ) - 33 больных (22 татар, 11 русских).

Для выделения H. pylori использовали бактериологический метод. Из кусочка биоптата, готовили взвесь, растирая его в ступке с 1 мл физиологического раствора. Гомогенат высевали на плотные питательные среды: кровяной агар (КА), кровяной агар с амфотерицином В в концентрации 2 мкг/мл (КАА) и эритрит-кровяной агар с амфотерицином В (ЭКАА). Посевы инкубировали в микроаэрофильных условиях при 37⁰ С в течение 5 суток. Идентификацию H.pylori проводили по характерным морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам.

Полученные изоляты H.pylori помещали в физиологический раствор и хранили в холодильнике при температуре -18°С. Выделение ДНК производили с помощью набора ДНК-сорб-В (Интерлабсервис). Реакцию CagA Multiplex проводили в 10 мкл реакционной смеси, содержащей 1 мкл буфера 10x ( 100 mM Tris-HCl, 500 mM KCl, 15 mM MgCl₂, 1% Triton X-100), смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов, по 1 мкл 10pM каждого праймера (CagA1, CagA2, CagA3, CagA4), 0,05 мкл Tag-полимеразы (Promega) и 2 мкл ДНК Н. pylori при следующем температурном режиме: инициальная денатурация 94⁰С – 4 мин; денатурация 94⁰С – 30с, отжиг 58⁰С – 30 с, элонгация 72⁰С – 30 с в течение 40 циклов; заключительная элонгация 72⁰С – 7 мин. Реакцию VacA Multiplex проводили в 16 мкл реакционной смеси, содержащей 1,2 мкл буфера 10x, 0,2мкл смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов, по 0,3 мкл праймеров Va1F и Va1R и по 0,48 мкл VagF и VagR 10pM, 0,05 мкл Tag-полимеразы (Promega) и 8 мкл ДНК Н. pylori при следующем температурном режиме: 94⁰С – 4 мин; 94⁰С – 30с, 60⁰С – 30 с, 72⁰С – 30 с - 35 циклов; 72⁰С – 7 мин. Амплификацию проводили с помощью амплификатора GeneAmp 2400. Выявление амплифицированных фрагментов осуществляли путем их электрофоретического разделения в 1% геле с добавлением этидия бромида и визуализации в виде светящихся полос под действием ультрафиолетового свечения. Изображение с электрофоретического геля документировали при помощи видеосистемы GelImiger-2. Положительный контроль CagA соответствовал 400 (a1/a2) и 603 (a3/a4) п.н.; VagA - 259 и 286 п.н.(s1/s2), 567 и 642 п.н. (m1/m2).

Результаты и их обсуждение. Частота обнаружения H.pylori в биоптатах слизистой оболочки желудка составила 80,3%. Бактериологическим методом было получено 57 штаммов, в том числе от больных ХГ и ХГД – 14 (68,2%), ЯБЖ – 14 (87,5%), РЖ – 29 (84,3%). Существенных различий распространенности H.pylori – инфекции среди татар и русских не отмечено (75,6% и 82,6% соответственно).

Республика Татарстан является многонациональной, но большую часть населения составляют татары (58,5%) и русские (39%), относящиеся к различным этническим группам (тюркской и славянской). С целью определения популяционной генетической структуры штаммов H.pylori, выделенных от основных этнических групп, проживающих на территории РТ, случаи были сгруппированы в зависимости от национальной принадлежности больных.

Таблица. Распределение генотипов H.pylori в зависимости от принадлежности к этнической группе.

Генотипы	Русские (n=24)	Татары(n=32)
VacAs1	8	23
VacAs2	2	4
VacAm1	6	20
VacAm2	4	7
CagAa1/a2	8	24
CagAa3/a4	4	5
CagA-	8	7
VacA-	10	9
ТипI CagA^+ VacA^+	13(54,2%)	22 (68,8%)
Тип Ia CagA^+ VacA^−	3(12,5%)	3 (9,4%)
Тип Ib CagA^−VacA^+	1(4,2%)	1 (3,1%)
Тип II CagA^−VacA^−	7 (21,9%)	6 (18,8%)

Результаты проведенного исследования показали, что большинство изолятов H.pylori, выделенных от жителей РТ, относятся к европейскому генотипу СagA⁺ VacA⁺ (тип I). Большинство изолятов H.pylori, выделенных от татар, имело генотип VacAs1 (71,9% случаев) и VacAm1 (62,5% случаев), тогда как у русских преобладания какого-либо генотипа не было выявлено (VacAs1 в 33,3%, VacAm1 в 25% случаев). Высокая частота встречаемости генотипа VacAs1m1, обладающего максимальным уровнем токсинообразования, у этих больных может свидетельствовать о существовании высокого риска развития недоброкачественной патологии в данной популяционной группе. У представителей двух популяций, проживающих на одной территории в одинаковых социально-экономических условиях генотип штаммов H.pylori различается весьма существенно, что может оказывать влияние на структуру патологии желудочно-кишечного тракта, хотя для подтверждения данной гипотезы необходимо исследование с большим количеством случаев. Этот факт может быть объяснен влиянием различных факторов. Возможно, что различные штаммы H.pylori могут быть ассоциированы с различиями в структуре слизистой оболочки желудка, особенностями местного иммунного ответа на внедрение бактерии, национальными традициями в характере питания у русских и татар.

Вывод. Различия генотипов H.pylori у различных этнических групп могут объяснять различия в структуре распространенности патологии желудка и 12-перстной кишки.