Тюленева Е.А., Давыденко И.С.

Буковинский государственный медицинский университет

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССОВ АПОПТОЗА В ЭКСТРАХОРИАЛЬНЫХ ПЛАЦЕНТАХ

Одной из наиболее распространенных аномалий плаценты является так называемая экстрахориальная плацента. К ней относят плаценту, окруженную ободком, - placenta сіrcummarginata и плаценту, окруженную валиком, - placenta сіrcumvallata. Первая характеризуется тем, что плодная оболочка прикрепляется не к краю плаценты, а на определенном расстоянии, в среднем на 1-3 см от края. Часть ткани плаценты, которая находится снаружи за границей прикрепления плодных оболочек, является экстрахориальной. Placenta сіrcumvallata отличается от placenta сіrcummarginata тем, что экстрахориальная часть плацентарной ткани содержит значительное количество фибриноида, за счет чего она выступает над поверхностью органа, что макроскопически выглядит как валик. Существует мнение, что экстрахориальная плацента возникает в связи с круговой кратковременной отслойкой плаценты по периферии органа с последующей самоликвидацией отслойки. Нами в предыдущих исследованиях (Е.А.Тюленева, И.С.Давыденко, Коваль Ю.И., 2004) показано, что экстрахориальные плаценты отличаются характерными органометрическими признаками: при сохранении в среднем общего объема органа, тем не менее, существенно уменьшается площадь его наибольшего сечения, но возрастает средняя толщина. Такие макроскопические особенности строения экстрахориальных плацент побудили нас к попыткам выявления морфогенетических причин их развития, для чего были применены методы изучения локальной регуляции количества клеток, прежде всего – процессов клеточной пролиферации и апоптоза. В данной работе представлены результаты исследования некоторых аспектов апоптоза.

В синцитиотрофобласте и стромальних клетках хориальных ворсин 14-ти экстрахориальных плацент и 16-ти плацент типичной дискообразной формы при физиологичной беременности и родах (контроль) иммуногистохимическими методами изучен процент апоптотических ядер (апоптотический индекс), содержание и распределение проапоптотичного цитозольно-митохондриального протеина Bax (Bcl-2 ассоциированный протеин Х) и антиапоптотичного митохондриального протеина Bcl-2 (onkoprotein B-cell lymphoma-2). Для идентификации апоптотических клеток (с характерными для апоптоза интернуклеосомальными разрывами ДНК) использовали метод TUNEL с применением тест-системы TACS XL™ (R&D Systems, Inc., USA) с последующей докраской клеточных ядер (ядерной ДНК) метиловым зеленым. Для иммуногистохимической идентификации протеинов Bax и Bcl-2 использовали первичные антитела к этим антигенам и стрептавидинбиотиновую систему визуализации LSAB2 (пероксидазная метка + диаминобензидин) производителя DakoCytomation (Denmark-USA). Максимально придерживались стандартизации протокола методики для всех гистологических срезов. Докраску ядер выполняли гематоксилином Майера. Количественные исследования проводили следующим образом. Сначала получали цифровые копии (с разрешением 1600х1200 пикселей) оптического изображения фрагментов хориальных ворсин при использовании цифрового фотоаппарата и объектива микроскопа х70 (водная иммерсия). Затем цифровые копии изображения анализировали посредством лицензионной копии компьютерной программы "ВидеоТесТ - Размер 5.0" (ООО ВидеоТесТ, Россия), а именно – проводили компьютерную микроденситометрию мест специфического окрашивания и подсчёт апоптотических клеток. Микроденситометрический анализ осуществлялся на основании зондовых измерений по площади среза цитоплазмы по двум показателям: "Средняя яркость" (в единицах яркости) "Отклонение яркости" (в единицах яркости). Статистическое сравнение средних величин осуществляли с помощью непарного критерия Стьюдента.

В экстрахориальных плацентах изучали котиледоны экстрахориальной части органа по сравнению с другими его отделами. В плацентах типичной формы раздельно изучали центральные, парацентральные и периферические отделы.

В результате проведенных исследований получены следующие результаты. Установлено, что во всех без исключения плацентах наблюдается общая закономерность: усилен апоптоз клеток синцитиотрофобласта (в наибольшей мере), а также стромальных клеток (в меньшей мере) хориальных ворсин на периферии органа (для экстрахориальных плацент – в эстрахориальной её части) в сравнении с центральными и парацентральными отделами. Об этом свидетельствуют ряд признаков: увеличение апоптотического индекса (в среднем в 3,4 раза – для синцитиотрофобласта и в 1,8 раза – для стромальных клеток), появление признаков активирующей гомоолигомеризации и транслокации проапототического протеина Вах при отсутствии реакции антиапоптотического протеина Bcl-2 либо даже снижении его концентрации в синцитиотрофобласте.

При сравнении показателей апоптоза между экстрахориальными и типичными плацентами выявлены существенные (р<0,05) отличия в интесивности апоптоза в периферических отделах органа, тогда как для центральных и парацентральных отделов отличий не отмечено. Отличия состоят в том, что в экстрахориальных плацентах в их периферической (экстрахориальной) части апоптотический индекс выше, чем в аналогичных по локализации отделах типичных плацент в среднем в 2,4 раза для синцитиотрофобласта и 1,5 раза для стромальных клеток хориальных ворсин. Кроме того, в экстрахориальных плацентах по сравнению с типичными плацентами отмечается более значительная степень активации (гомоолигомеризации и транслокации) проапоптотического протеина Вах, но снижение концентрации антиапоптотического протеина Bcl-2.

Таким образом, имеется достаточно оснований считать, что процессы апоптоза синцитиотрофобласта и стромальных клеток хориальных ворсин в периферических отделах плаценты играют существенную роль в формировании макроскопических признаков экстрахориальных плацент.